竹叶黄酮提取工艺研究120203

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1、竹叶总黄酮提取工艺研究陈宇基金项目：莆田学院大学生创新项目，莆田学院大学生科研立项（10192）作者简介：陈宇（1980－），女（汉），辽宁沈阳人，讲师，硕士，主要从事天然产物的提取分离与测试工作。E-mail:chenyuisme@yahoo.com.cn，邓金木，林丽丽，吴慧龙，杨建建，钟红金（莆田学院环境与生命科学系莆田351100）摘要：探讨用醇提法提取竹叶中黄酮类成分的最佳工艺，为竹叶的开发利用提供理论依据。以竹叶为试材，以乙醇为溶剂，采用分光光度法对竹叶中的黄酮类化合物的含量进行测试。通过单因素试验研究乙醇浓度、料液比、提取温度、提取时间对总黄酮提

2、取率的影响,再采用正交试验法优化提取总黄酮的最佳工艺条件。单因素和正交试验表明：影响黄酮提取率的因素主次顺序是：料液比>乙醇浓度>提取时间>浸润时间。最佳实验条件为料液比1﹕20，60%的乙醇，60℃提取4小时，竹叶中黄酮的含量为7.88mg·g-1。关键词：竹叶黄酮类化合物正交试验中图分类号：S718.4竹子是禾本科(Poaceae)竹亚科(Bambusoideae)多年生常绿植物，研究表明，竹叶中含有大量的黄酮类化合物[1-2]和其他生物活性成分，如酚酸、蒽醌类化合物、活性多糖、香豆素类内醋、特种氨基酸等[3-4]，其中黄酮是其主要的生理活性成分[5]。生

3、物类黄酮化合物具有清除自由基、抗衰老和预防心血管疾病等生理功能[6-8]。目前，对竹叶黄酮类物质功能作用的研究已成为一个热点，为此，本研究以莆田学院校园内的竹子叶片为材料，研究了竹叶黄酮提取工艺，并采用正交试验优化黄酮提取工艺，为竹子的综合开发利用提供参考。1材料与方法1.1材料1.1.1原材料：竹叶（佛肚竹）采至芳名湖畔，经烘箱70℃烘干，再用研钵研碎，过60目筛备用。1.1.2试剂：芦丁标准品（99%，郑州荔诺生物科技有限公司），氢氧化钠、三氯化铝、硝酸铝、亚硝酸钠、乙醇、石油醚等均为分析纯试剂。1.1.3主要仪器：BS224S电子天平赛多利斯科学仪器（北

4、京）有限公司、722型分光光度计上海光谱仪器有限公司制造、DGH-9246电热鼓风干燥箱上海精宏实验设备有限公司、RE52CS-2旋转蒸发仪上海亚荣生化仪器厂、恒温水浴锅国华电器有限公司。1.2方法1.2.1标准曲线的绘制称取10mg芦丁标准品，用30%乙醇标定在50mL的容量瓶中，配成浓度为0.200mg·mL-1的芦丁溶液再分别取0mL、1mL、2mL、3mL、4mL、5mL于25mL的比色管中，在每个比色管中加入1mL5%的NaNO2充分振荡6分钟再加入1mL5%的Al(NO3)3，振荡5min，再加入10mL10%的NaOH，再定容到刻度线，以试剂空白

5、为参比液，2于510nm处测其吸光度，以吸光度A为纵坐标，浓度C为横坐标绘制标准曲线，用最小二乘法进行回归，得C与A关系曲线的回归方程。1.2.2提取及测定方法称取一定量干燥的竹叶颗粒，加入一定体积和一定浓度的溶剂，在一定温度下加热回流提取一定时间，过滤，滤渣用少量同浓度溶剂洗涤合并滤液，在用旋转蒸发仪出去多余的溶剂，将所得的浓缩液用石油醚萃取多次后，取下层溶液，定容至50mL，充分摇匀备用。分别从各组不同实验条件所得的定容样品溶液中移取1.00mL竹叶提取液至25mL量瓶中，加入蒸馏水定容，摇匀；加入5%的NaNO2溶液1mL充分振荡6分钟，再加入5%的Al

6、(NO3)3溶液1.00mL，振荡5min，最后加入10%的NaOH溶液10mL。用蒸馏水定容至25.00mL，以试剂空白为参比，测吸光度。2结果与分析2.1芦丁标准曲线按绘制曲线的方法，得出的实验结果如图1：芦丁浓度mg•mL-1吸光度A图1芦丁标准曲线由曲线得出其曲线方程为：A=10.1143C-0.0096，相关系数R2为0.9968。22.2提取时间的影响称取干燥的竹叶5份，在圆底烧瓶中加入120.00mL70%的乙醇溶剂，提取时间依次为1，2，3，4，5h，按照1.2.2的方法研究不同的提取时间对黄酮得率的影响，结果见图2。时间/h得率/%图2黄酮得

7、率随浸提时间的变化关系7从图2可知，黄酮的提取率随着提取时间的增大逐渐升高，当浸提时间为3h时提取率最高，当时间超过3h之后，提取率开始下降，这可能是由于随着浸提时间的加长，黄酮物质在浸提剂中逐渐分解造成的。2.3乙醇浓度对提取率的影响提取时间为3h，提取液分别为40%，50%，60%。70%，80%，90%的乙醇溶液，按1.2.2的方法用量，以试剂空白作为参比液，测吸光度，实验结果见图3。乙醇浓度得率/%图3黄酮得率随乙醇浓度的变化关系从图3可以看出，随着乙醇浓度的升高，黄酮的提取率逐渐呈上升的趋势，当乙醇的浓度达到60%附近时黄酮的得率最高，之后随着乙醇浓

8、度的增大，提取率反而呈现下降的趋势，这