水产品中硝基呋喃类代谢物的快速检测

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1、附件5水产品中硝基呋喃类代谢物的快速检测胶体金免疫层析法（KJ201705）1　范围本方法规定了水产品中硝基呋喃类代谢物快速检测方法。本方法适用鱼肉、虾肉、蟹肉等水产品中呋喃唑酮代谢物（AOZ）、呋喃它酮代谢物（AMOZ）、呋喃西林代谢物（SEM）、呋喃妥因代谢物（AHD）的快速测定。2　原理样品中硝基呋喃类代谢物经衍生处理后，其衍生物与胶体金标记的特异性抗体结合，抑制抗体和检测卡/试纸条中检测线（T线）上硝基呋喃类代谢物-BSA偶联物的免疫反应，从而导致检测线颜色深浅的变化。通过检测线与控制线（C线）颜色深浅比较，对样品中硝基呋喃类代谢物进行定性判定。

2、3　试剂和材料除另有规定外，本方法所用试剂均为分析纯，水为GB/T6682规定的二级水。3.1　试剂3.1.1　盐酸。3.1.2　三水合磷酸氢二钾。3.1.3　氢氧化钠。3.1.4　甲醇。3.1.5　乙醇。3.1.6　乙腈。3.1.7　邻硝基苯甲醛。3.1.8　三羟甲基氨基甲烷。3.1.9　乙酸乙酯。3.1.10　正己烷。3.1.11　邻硝基苯甲醛溶液（10mmol/L）:准确称取0.150g邻硝基苯甲醛，用甲醇（3.1.4）溶解并定容至100mL。3.1.12　磷酸氢二钾溶液（0.1mol/L）：准确称取22.822g三水合磷酸氢二钾（3.1.2），用

3、水溶解并定容至1000mL。3.1.13　氢氧化钠溶液（1mol/L）：准确称39.996g氢氧化钠（3.1.3），用水溶解并稀释至1000mL。1.1.1　盐酸溶液（1mol/L）：取10mL盐酸（3.1.1）加入到110mL水中。1.1.2　三羟甲基氨基甲烷溶液（10mmol/L）：准确称取1.211g三羟甲基氨基甲烷（3.1.8），溶于80mL水中，加入盐酸（约42mL）调pH至8.0后用水定容至1L。1.2　参考物质1.2.1　硝基呋喃类代谢物参考物质的中文名称、英文名称、CAS登录号、分子式、相对分子量见表1，纯度≥99%。表1硝基呋喃类代谢物

4、参考物质的中文名称、英文名称、CAS登录号、分子式、相对分子量中文名称英文名称CAS登录号分子式相对分子量3-氨基-2-恶唑烷酮3-anmino-2-oxazolidinone,AOZ80-65-9C3H6N2O2102.095-甲基吗啉-3-氨基-2-唑烷基酮5-morpholine-methyl-3-amino-2-oxazolidinone,AMOZ43056-63-9C8H15N3O3201.221-氨基-2-乙内酰脲盐酸盐1-Aminohydantoinhydrochloride,AHD2827-56-7C3H5N3O2·HCl151.55氨基

5、脲盐酸盐semicarbazidhydrochloride,SEM563-41-7NH2CONHNH2·HCl111.53注：或等同可溯源物质。1.3　标准溶液的配制1.3.1　标准储备液：分别准确称取适量参考物质（精确至0.0001g），用乙腈溶解，配制成100mg/L的标准储备液。-20℃冷冻避光保存，有效期12个月。1.3.2　混合中间标准溶液：准确移取标准储备液（3.3.1）各1mL于100mL容量瓶中，用乙腈定容至刻度，配制成浓度为1mg/L的混合中间标准溶液。4℃冷藏避光保存，有效期3个月。1.3.3　混合标准工作溶液：准确移取0.1mL混合

6、中间标准溶液（3.3.2）于10mL容量瓶中，用乙腈定容至刻度，配制成浓度为0.01mg/L的混合标准工作溶液。4℃冷藏避光保存，有效期1个月。1.4　材料1.4.1　AOZ试剂盒（含胶体金试纸条或检测卡及配套的试剂）。1.4.2　AMOZ试剂盒（含胶体金试纸条或检测卡及配套的试剂）。1.4.3　SEM试剂盒（含胶体金试纸条或检测卡及配套的试剂）。1.4.4　AHD试剂盒（含胶体金试纸条或检测卡及配套的试剂）。1.4.5　固相萃取柱（强阴离子交换型）：规格1mL，填装量为60mg。2　仪器和设备2.1　电子天平：感量分别为0.1g和0.0001g。2.2

7、　均质器。1.1　水浴箱。1.2　离心机。1.3　氮吹仪或空气吹干仪。1.4　移液枪：10µL，100µL，1000µL，5000µL。1.5　涡旋振荡仪。1.6　胶体金读数仪（可选）。1.7　固相萃取装置（可选）。1.8　环境条件：温度15-35℃，湿度≤80%。2　分析步骤2.1　试样制备按照方法要求，称取一定量具有代表性样品可食部分（注：甲壳类，试样制备时须去除头部），用于后续实验。2.2　试样提取和净化称取适量的匀浆样品（以试剂盒操作说明书要求来定，精确至0.01g）于50mL离心管。2.2.1　方法一（液液萃取法）称取2g±0.05g均质组织样

8、品于50mL离心管中，依次加入4mL去离子水、5mL1mol/L盐酸（3.1.1