呋喃西林代谢物快速检测

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1、呋喃西林代谢物（SEM）快速检测试一、原理本试剂盒采用间接竞争ELISA方法检测水产和鸡肉等组织样本中的SEM，在微孔条上预包被上偶联抗原，利用抗原与抗体的特异性免疫化学反应的原理来进行的，样本中的SEM和微孔条上预包被偶联抗原竞争抗呋喃西林代谢物的衍生物抗体，加入酶标记物后，用TMB底物显色，样品中的SEM含量与样品的吸光度值呈反比，与标准曲线比较即可得出呋喃西林代谢物含量。二、试剂盒技术指标：试剂盒灵敏度：0.1ppb样本检测下限：组织、蜂蜜——————0.2ppb回收率：鱼/虾水产组织—————85%±10%蜂蜜/鸡肉/肝脏样本

2、————75%±15%交叉反应率：呋喃西林代谢物—————100%呋喃它酮代谢物—————＜0.1%呋喃妥因代谢物—————＜0.1%呋喃唑酮代谢物—————＜0.1%三、试剂盒组成1．微量测试孔：每条8孔，一板12条2．标准液X6瓶：（1ml/瓶）0ppb、0.1ppb、0.3ppb、0.9ppb、2.7ppb、8.1ppb3．酶标记物12ml………………红色帽4．抗体浓缩液1ml……………..蓝色帽5．底物A液7ml………………白色帽6．底物B液7ml…………….黑色帽7．终止液7ml………………黄色帽8．20X浓缩洗涤液40ml

3、………白色帽9．2X浓缩复溶液50ml………透明帽10．10ml衍生化试剂…………..白色帽（不能与其它衍生化试剂混用）11.样本提取液500ml…………黑色帽（不能与其它试剂混用）四、所用仪器、试剂具备的仪器：微孔酶标仪、打印机、均质器、氮气吹干装置、振荡器、离心机、刻度移液管、天平（感量0.01g）微量移液器：单道20µl-200µl，100µl-1000µl、多道250µl试剂：氢氧化钠、正己烷、浓HCl、磷酸氢二钾、邻硝基苯甲醛、亚硝基铁氰化钾（K2Fe（CN）5•NO•3H2O）ZnSO4•7H2O五、样本前处理步骤样本处理

4、前须知处理任何样本时，都必须注意：（a）实验中必须使用一次性吸头，在吸取不同的试剂时要更换吸头。（b）实验之前须检查各种实验器具是否干净，必要时可对实验器具进行清洁，以避免污染干扰实验结果。样本前处理需配制：1．用去离子水将2×浓缩复溶液按1：1稀释，用于提取后的样本复溶2．C液：（供奶样用）称12.5g亚硝基铁氰化钾用去离子水定溶至100ml。D液：（供奶样用）称29.8g硫酸锌用去离子水溶解定溶至100ml。3．0.1MK2HPO4称22.8gK2HPO4•3H2O加去离子水溶解定溶至1L4．1MHCl取8.6ml浓HCl加水定溶

5、至100ml。5．1MNaOH称取4gNaOH加水定溶至100ml。样本的处理(a)肉样或鱼虾用均质器均质样本,接（d）的描述方法(b)奶样1.取出5ml的奶样本到玻璃离心管中,分别加入C液和D液各250µl。2.用振荡器充分混合样本,用恒温离心机4000r/min以上离心10min(4-12℃).若没有恒温离心机,则先将样本降温至大约8℃,然后离心。3.接(d)的描述方法(c)蜂蜜1.取1±0.05g样本到离心管中。2.加入4ml的去离子水溶解,再加入0.5ml1MHCl和100µl衍生化试剂,充分振荡。3.接(d)第2步描述方法(

6、d)接上面的方法1.取1±0.05g的均质样本(肉样/鱼虾)、牛奶的离心上清液1.1ml（相当1ml奶样），分别加入4ml的去离子水，0.5ml1MHCl和100µl衍生化试剂，充分振荡。2.置于37℃过夜孵育（大约16h）。3.分别加入5ml0.1MK2HPO4，0.4ml1MNaOH和5ml的样本提取液，充分振荡30s；4.在室温下（20-25℃）4000r/min以上离心10min。5.取出2.5ml的样本提取液到另一洁净容器中于50℃氮气/空气吹干。6.用1ml正己烷溶解干燥物，用1ml已稀释好的复溶液充分混合；在室温下（20

7、-25℃）4000r/min以上离心10min。7.取50µl下层相用于分析。样本稀释倍数：2六、酶标免疫分析程序1．从4℃冷藏环境中取出所需试剂，置室温（20-25℃）平衡30min以上，注意每种液体试剂使用前均须摇匀。2．取出需要数量的微孔及框架，将不用的微孔放入自封袋，保存于2-8℃。3．配液：将40ml浓缩洗涤液（20倍浓缩）用蒸馏水或去离子水稀释至800ml备用（或按需要量稀释）。4．编号：将样本和标准品对应微孔按序编号，每个样本和标准品做2孔平行，并记录标准孔和样本孔所在的位置。5.将浓缩抗体用已稀释好的复溶液11倍稀释（

8、1份抗体加入10份稀释液）6．加标准品/样本50µl/孔到各自的微孔中，然后加抗体50µl/孔，用盖板膜封板，轻轻震荡混匀。37℃环境中反应30min。7．取出将孔内液体甩干，用洗液250µl/孔洗板4-5次，每次间隔1