NYT727-2003饲料中呋喃唑酮的测定高效液相色谱法.pdf

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1、NY/T727-2003前言本标准修改采用ISO14797:1999(E)((高效液相色谱法测定饲料中映喃哇酮含量)}(英文版)。本标准根据ISO14797:1999(E)重新起草。考虑到我国国情和实验室设备状况，在采用ISO14797:1999(E)时，本标准做了一些修改。有关技术性差异和编辑性修改已编人正文中并在它们所涉及的条款的页边空白处用垂直单线标识在附录B中给出了这些技术性差异及编辑性修改的一览表以供参考。本标准的附录A、附录B均为资料性附录。本标准由中华人民共和国农业部提出。本标准由全国饲料标准化

2、技术委员会归口。本标准负责起草单位:国家饲料产品质量监督检验中心(北京)，参加起草单位:农业部饲料工业中心。本标准主要起草人:同惠文、杨曙明、赵小阳、王彤、杨文军。NY/T727-2003饲料中映喃哇酮的测定高效液相色谱法1范围本标准规定了高效液相色谱(HPLC)法测定配合饲料、预混合饲料及浓缩饲料中峡喃哇酮的方法。本标准可用于含10mg/kg-5000mg/喃吠喃哇酮的配合饲料和含量为。.5%^-20写的预混合饲料及浓缩饲料。2规范性引用文件下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注日期的引

3、用文件，其随后所有的修改单(不包括勘误的内容)或修订版均不适用于本标准，然而，鼓励根据本标准达成协议的各方研究是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本标准。GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法GB/T14699.1饲料采样方法3原理配合饲料以少量水湿润，用乙睛和甲醇的混合液将吠喃哇酮提取出来，预混合饲料和浓缩饲料直接用乙腊和甲醇的混合液将吠喃哩酮提取出来，提取液经氧化铝短柱净化，用稀释液稀释后在反相一HPLC上分离，紫外检测器365nm处测定。4试剂和材料除非另有说明，

4、在分析中仅使用确认为优级纯或色谱纯的试剂。4.1水:符合GB/T6682一级用水的规定。4.2提取剂:乙睛，甲醇二1:1。充分混匀，使用前放至室温。4.3稀释剂;将350mL提取剂(4.2)与650mL水(4.1)混合。4.410%乙酸溶液:将10mL冰乙酸用水稀释至100mL.4.5乙酸钠缓冲液，c(CH,C仪NO=0.01mol/L,pH=6。。用约700mL水溶解0.82g乙酸钠.用乙酸溶液(4.4)将pH调至6.0，加水稀释至1000mL,混匀。4.6HPLC流动相:取800ml乙酸钠缓冲液(4.5)

5、和200mL乙睛，混合均匀，通过0.2km的滤膜过滤，用前超声脱气10min,4.7吠喃哇酮标准物:N-(5-硝基-2-吠喃甲叉-3-氨基一2-u3,哇烷酮。注意:由于肤喃哇酮对光十分敏感，所有操作都应在避光条件下操作，操作时还应避免吸入、接触有毒的肤喃哇酮标准物和溶液.配制溶液要在通风橱内进行，工作注意带眼镜、穿工作服防护。4,8峡喃哩酮贮备液(约250pg/m1,):称取25mg士1mg吠喃哩酮标准物(4.7)，准确至。.1mg，用提取液(4.2)溶解，稀释至100ml，混匀，贮于。0C:--8℃冰箱中。

6、计算溶液浓度时要计人标准物的纯度。溶液有效期一个月。4.9吠喃哇酮工作液(约5Wg/mL和12.5tg/mL0:准确吸取2.0mL和5.0ml贮备液(4.8)分别置于100mL容最瓶中，加65mL水，用提取液(4.2)稀释至刻度并棍匀，每批样品均需制备新鲜的工tNY/T727-2003作液。4.10中性氧化铝，活度1(对于全去活的氧化铝可有。%-l%的水)。处理方法如下:将中性氧化铝(100目一200目)放人马福炉，于550℃灼烧3h，移至干燥器中冷却，装人密封容器中保存。5仪器设备常用的实验室仪器设备，特别

7、是下述仪器设备:5.1pH计(带温度补偿，精确至0.01),5.2溶剂过滤系统，全玻璃滤器，孔径。2tame5.3超声水浴。5.4振荡器，水平方向振荡，频率250r/min-300r/min,5.5过滤装置，使用中速滤纸。5.6玻璃纤维。5.7玻璃层析柱，长30cm，内径10mm，末端缩小能放置玻璃毛。5.8过滤系统，能安放孔径为0.2pm聚二氟乙烯(PVDF)或聚四氟乙烯(PTFE)滤膜。5.9HPLC系统，由下述部件组成:5.9.1泵，无脉冲，能将流速保持在。.1mL/min-2.0mL/min,5.9.

8、2进样系统，进样环体积201