sop标准操作程序-ckmb

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1、SOP标准操作程序CKMB肌酸激酶同功酶（货号：OSR6153）实验原理：测定CKMB（EC2.7.3.2）用于心肌梗塞的诊断和治疗以及肌性疾病，例如：杜兴肌营养不良症。CK是由两分子聚合物，由M和B两个亚基组成，同功酶分为CKMM、CKMB和CKBB三种。在心肌梗塞时CKMM的高峰主要出现于胸痛后的18到30小时，升高很像总CK活性。可是CKMB的高峰出现于胸痛后的12小时，比总CK活性和CKMM要早。在心肌梗塞中测定CK与CKMB活性的重要性远远大于总CK。方法学：Olympus公司CKMB的测定

2、方法采用的是改良Szasz法，试剂1中含有M亚基的抗体，这样就抑制了M亚基的活性。B亚基的活性在加入R2后表现出来。CK能使磷酸肌酸和ADP中的磷酸键转移生成肌酸和ATP。ATP与葡萄糖在HK已糖激酶与镁离子的作用下生成6-磷酸-葡萄糖。6-磷酸-葡萄糖与NADP在6-磷酸-葡萄糖脱氢酶作用下生在6-磷酸-葡萄糖酸和NADPH。在340/380nm下测定NADPH形成的速率来测定CKMB的活性。CK磷酸肌酸+ADP-------------﹥肌酸+ATPHKATP+葡萄糖-------------﹥A

3、DP+6-磷酸葡萄糖G-6-PDH6-磷酸葡萄糖+NADP-------------﹥6-磷酸葡萄糖酸+NADPH+H标本：病人准备：无特殊要求。类型：无溶血的血清或肝素化的血浆。标本凝集后尽快分离血清，轻微的溶血会被红细胞中的ADK污染。不可以使用EDTA、枸橼酸盐、草酸盐血浆。标本准备：避光保存可以保持最的稳定性。CK可以在20～25℃稳定4小时，2～8℃稳定8～12小时，﹣20℃可以稳定一个月。仪器与材料:仪器：奥林巴斯AU640生化分析仪材料：奥林巴斯AU640肌酸激酶同功酶（CKMB）参与反

4、应成份的最终浓度：咪唑缓冲液（PH6.7）0.1mmol/LHK≧2.5kU/LNADP2.0mmol/L醋酸镁10mmol/LG-6-PDH≧1.5kU/LADP2.0mmol/LAMP5mmol/LDiadenosinepentaphosphate0.01mmol/LEDTA2.0mmol/L葡萄糖20mmol/L磷酸肌酸30mmol/LN-乙酰半胱氨酸20mmol/LCK-M亚基的抗体变化的其中含有稳定剂与保护剂。注意：1.此试剂为体外诊断用。2.不要入口，吞下有害。保护剂为叠氮钠，与下水管中的

5、铜反应形成爆炸性化合物，如果排向下水道请用大量的水冲洗。试验用试管的直径在12～16mm。试剂准备：试剂1：红盖的的全部酶试剂必须缓冲液溶解。试剂2：绿盖的的全部酶试剂必须缓冲液溶解。执行参数（性能参数）：以下数据是根据奥林巴斯AU640CKMB试剂已经建立的程序。重复性：重复性的评估是根据NCCLS推荐的典型方法，AU640批内重复性小于5%或SD≦2U/L，总不精密度小于10%或SD≦4U/L。用于分析的质控血清和数据处理符合以上的NCCLS的规则。N=60批内精密度总精密度平均值（U/L）SDC

6、V%SDCV%21.70.371.750.622.85202.20.860.421.310.651290.24.760.376.760.52方法学比较：奥林巴斯AU640CKMB（方法1）与其它奥林巴斯分析仪器（方法2），共同做62个病人标本。相关系数达到0.99，回归方程如下：CKMB方法1=（CKMB方法2×0.939）－0.64病人结果数值分布：10.0～1750U/L试剂的贮存：1.当保存于2～8℃，不开盖情况下至标签的失效期。2.开盖后放于仪器中可以稳定5天。变质指示：当试剂有浊度时，不能继

7、续使用。校准：标准液的准备：这个实验不需要标准液。校准程序：CKMB的校准中基于NADPH的摩尔消光系数，在340/380nm为4960。质控：在每一批标本中都应把奥林巴斯水平I与II质控（DR0061&62）做为未知标本进行分析，也可以用CKMB三种水平的质控血清。操作程序（逐步地）：AU640开机1.认两瓶清洗剂有足够的量。2.打开蒸馏水供应系统的阀门。3.如果没有设定自动开机，请按分析仪器上的[POWERON]键。4.确认打印机为开机并处于联机状态。5.在[StartCondition]屏幕，输

8、入所需信息，并按F2退出。6.如果有需要请进入password。7.确认仪器上的在线试剂的位置是否正确、数量（体积）是否充足，不足请添加并在系统状态中的试剂状态检查试剂。8.在急诊台Wash1的位置的试管中加满一支1NHCL的样品针清洗液。开始分析:1.把定标、质控、和标本架放在仪器的RackFeed上。2.用鼠标点击在屏幕最上方[开始分析]图标。3.点击F2退出键退到主屏幕。分析参数样品体积5微升吐水量0微升试剂I体积125微升吐水量0微升试剂II体积