sop标准操作程序-ck

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1、SOP标准操作程序CK肌酸激酶(货号:OSR6179,OSR6279)实验原理:测定CK(EC2.7.3.2)用于心肌梗塞的诊断和治疗以及肌性疾病,例如:杜兴肌营养不良症。CK主要来源于骨骼肌、心肌与脑组织。在各种肌肉疾病与心肌梗塞时升高。在心肌梗塞时CK的高峰主要出现于胸痛后的24到36小时,升高可以达到正常值上限的10倍。在Reye’s综合征CK可以升高70倍。方法学:Olympus公司CK的测定方法采用的是改良Szasz法,CK能使磷酸肌酸和ADP中的磷酸键转移生成肌酸和ATP。ATP与葡萄糖在HK已糖激酶与镁离子的作用下生成6-磷酸-葡萄糖。6-

2、磷酸-葡萄糖与NADP在6-磷酸-葡萄糖脱氢酶作用下生在6-磷酸-葡萄糖酸和NADPH。在340/380nm下测定NADPH形成的速率来测定CK的活性。CK磷酸肌酸+ADP-------------﹥肌酸+ATPHKATP+葡萄糖-------------﹥ADP+6-磷酸葡萄糖G-6-PDH6-磷酸葡萄糖+NADP-------------﹥6-磷酸葡萄糖酸+NADPH+H标本:病人准备:无特殊要求。类型:无溶血的血清或肝素化的血浆。标本凝集后尽快分离血清,轻微的溶血会被红细胞中的ADK污染。不可以使用EDTA、枸橼酸盐、草酸盐血浆。标本准备:避光保存

3、可以保持最的稳定性。CK可以在20~25℃稳定4小时,2~8℃稳定8~12小时,﹣20℃可以稳定一个月。仪器与材料:仪器:奥林巴斯AU640生化分析仪材料:奥林巴斯AU640肌酸激酶同功酶(CK)参与反应成份的最终浓度:咪唑缓冲液(PH6.05)72mmol/LHK≧2.5kU/LNADP1.97mmol/L醋酸镁20.9mmol/LG-6-PDH≧1.5kU/LADP2.0mmol/LAMP5mmol/LDiadenosinepentaphosphate0.01mmol/LEDTA4.0mmol/L葡萄糖16mmol/L磷酸肌酸68mmol/LN-乙酰

4、半胱氨酸24mmol/L其中含有稳定剂与保护剂。注意:1.此试剂为体外诊断用。2.不要入口,吞下有害。3.保护剂为叠氮钠,与下水管中的铜反应形成爆炸性化合物,如果排向下水道请用大量的水冲洗。试验用试管的直径在12~16mm。试剂准备:奥林巴斯AU640的CK试剂是即开即用的。无需特殊准备。执行参数(性能参数):以下数据是根据奥林巴斯AU640CK试剂已经建立的程序。重复性:重复性的评估是根据NCCLS推荐的典型方法,AU640批内重复性小于5%,总不精密度小于10%。用于分析的质控血清和数据处理符合以上的NCCLS的规则。N=100批内精密度总精密度平均

5、值(U/L)SDCV%SDCV%1130.60.51.11.01440.60.42.01.45251.60.34.40.8方法学比较:奥林巴斯AU640CK(方法1)与其它奥林巴斯分析仪器(方法2),共同做181个病人标本。相关系数达到1.000,回归方程如下:CK方法1=(CK方法2×1.033)+0.7病人结果数值分布:15~1034U/L敏感度:每变化0.12毫吸光度相当于1U/L。试剂的贮存:1.当保存于2~8℃,不开盖情况下至标签的失效期。2.开盖后放于仪器中可以稳定30天。变质指示:当试剂有浊度时,不能继续使用。校准:标准液的准备:这个实验不

6、需要标准液。校准程序:CK的校准中基于NADPH的摩尔消光系数,在340/380nm为4960。质控:在每一批标本中都应把奥林巴斯水平I与II质控(DR0061&62)做为未知标本进行分析。操作程序(逐步地):AU640开机1.认两瓶清洗剂有足够的量。2.打开蒸馏水供应系统的阀门。3.如果没有设定自动开机,请按分析仪器上的[POWERON]键。4.确认打印机为开机并处于联机状态。5.在[StartCondition]屏幕,输入所需信息,并按F2退出。6.如果有需要请进入password。7.确认仪器上的在线试剂的位置是否正确、数量(体积)是否充足,不足请

7、添加并在系统状态中的试剂状态检查试剂。8.在急诊台Wash1的位置的试管中加满一支清洗液。开始分析:1.把定标、质控、和标本架放在仪器的RackFeed上。2.用鼠标点击在屏幕最上方[开始分析]图标。3.点击F2退出键退到主屏幕。分析参数样品体积4微升吐水量0微升试剂I体积80微升吐水量0微升试剂II体积80微升吐水量0微升波长340/380方法Rate读点17/27温度37℃完整的实验参数与操作程序可以在AU640用户手册中查到。计算:无需手工计算,结果为在37℃自动以U/L打印。报告结果:参考范围:32~237U/L参考值会因年龄、性别、饮食及地域的

8、不同而不同。根根据一个好的实验室的经验最好建立自已实验室的参考值。不正常结果的处

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