白三叶根的解剖结构观察

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1、研究生课程论文（作业）封面（2009至2010学年度第2学期）课程名称：植物显微技术课程编号：2.549学生姓名：李微学号：1004250年级：2010级提交日期：年月日成绩：__________________教师签字：__________________开课---结课：第周---第周评阅日期：年月日东北农业大学研究生部制白三叶根的解剖结构观察白三叶，学名：Trifoliumrepens，为豆目科三叶草属的多年生草本植物。别名：白车轴草、荷兰翅摇、白三草、白花三叶草等。茎匍匐，无毛，茎长30-60厘米。掌状

2、复叶有3小叶，小叶倒卵形或倒心形，长1．2—2．5厘米，宽1—2厘米，栽培的叶长可达5厘米，宽达3．8厘米，顶端圆或微凹，基部宽楔形，边缘有细齿，表面无毛，背面微有毛；托叶椭圆形，顶端尖，抱茎。花序头状，有长总花梗，高出于叶；萼筒状，萼齿三角形，较萼筒短；花冠白色或淡红色，旗瓣椭圆形。荚果倒卵状椭圆形，有3—4种子；种子细小，近圆形，黄褐色。花期5月，果期8-9月。本实验采用石蜡切片法，并结合番红、固绿染色法对白三叶根的解剖结构作了详细研究。1.试剂、材料及仪器1.1　材料：白三叶（Nicotianataba

3、cum）的根1.2　仪器与试剂：旋转切片机；展片台；温箱；乙醇：分析纯；二甲苯：分析纯；甲醛：分析纯；冰醋酸：分析纯；石蜡。2.方法2.1固定：将根和根尖切成0.5cm左右小段，转入70%的FAA溶液(70%乙醇：甲醛：冰醋酸=90：5：5)中固定24小时以上待用。2.2脱水及透明：70%酒精→85%酒精→95%酒精→纯酒精→纯酒精→2/3纯酒精+l/3二甲苯→1/2纯酒精+l/2二甲苯→1/3纯酒精+2/3二甲苯→纯二甲苯→纯二甲苯(每个梯度透明2h，其中95%酒精时加适量番红过夜，纯酒精及纯二甲苯为1h)

4、。2.3渗蜡：第二步纯二甲苯后加入适量蜡削至饱和，并置于37℃烘箱中过夜。第二天早上把烘箱调至65℃后，倒出1/2的体积，再加入1/2体积的纯蜡→倒出1/2体积，再加入1/2体积的纯蜡→倒出1/2的体积，再加入1/2体积的纯蜡→全部倒出，加入纯蜡→全部倒出，加入100%纯蜡(每个梯度2h，全部倒出为1h)。2.4包埋用预先用硬纸折成的纸船，编号后，把从65℃烘箱中取出的纯蜡倒入纸船中，用预热的镊子把材料迅速置入纸船中，摆好位置，自然冷却。2.5修块及切片：待纸船中的蜡完全凝固后，将蜡块取出，用单面刀片修刻成梯

5、形，粘附于小木块上。旋转切片机切片，厚度为8μm。2.6粘片及展片：在干净的载玻片上涂微量粘片剂(1：1的蛋白质与甘油)，把蜡带按顺序置于载玻片上，滴适量蒸馏水，置于45℃的展片台上，使蜡带完全舒展。2.7烘片：将载玻片置于38℃的烘箱中4～7天，烘干。2.8染色：把烘干的载玻片放在染色架上，按下列步骤进行染色：纯二甲苯(1h)→纯二甲苯(1min)→2/3纯酒精+l/3二甲苯(2min)→1/2纯酒精+l/2二甲苯(2min)→1/3纯酒精+2/3二甲苯(2min)→100%酒精(1min)→90%酒精(2

6、min)→85%酒精(2min)→70%酒精(2min)→50%酒精(2min)→30%酒精(2min)→蒸馏水(2min)→1%番红(5min)→蒸馏水(2min)→30%酒精(2min)→50%酒精(2min)→75%酒精(2min)→85%酒精(2min)→95%酒精(2min)→0.5%固绿(15～30s)→95%酒精(2min)→100%酒精(1min)→l/2二甲苯+1/2酒精(2min)→纯二甲苯(1min)→纯二甲苯(1min)。2.9封片、干燥及观察：中性树胶封片，于38℃烘箱中干燥。Nik

7、on显微镜观察并照相。3.结果与分析3.1白三叶根部横切面：无明显的表皮，外皮层细胞排列紧密而整齐；细胞间有明显空隙；能清楚地看到根的初生结构由外至内分别为皮层、维管柱、中柱鞘和木质部等（见图1，A）；木质部细胞少，可看到明显的木栓层和栓内层（见图1，A和B）。A10×10B10×20图1.白三叶根部的横切面3.2根尖纵切面：根尖各个结构分区明显，有分生区、伸长区、成熟区；表皮细胞排列紧密，细胞呈方形；伸长区内有明显的液泡，表皮好像有突起。图2.白三叶根尖横切面10×204.讨论白三叶于16世纪后期在荷兰首先

8、栽培，现在温带地区广泛分布。喜温暖湿润气候，适应性广，耐酸性强，pH4.5的土壤仍能生长，除盐碱土外，排水良好的各种土壤均可生长。再生性好,耐践踏,属放牧型牧草。所以其根部细胞排列紧密，间隙大，木质部发达，表皮层较厚，能够适应酸性环境。根部结构与其生长习性密切相关。制作石蜡切片如用番红固绿染色法，其操作过程可做如下调整：将在95%乙醇加番红过夜，改为在1/2纯酒精+l/2二甲苯加番红过夜。这样有如下