高效液相色谱法测定甘草苷和甘草酸含量—科标检测

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1、高效液相色谱法测定甘草苷和甘草酸含量甘草是蕴藏量大、药用价值高的一种荒漠草原药用植物，其主要有效成分为甘草酸和黄酮类化合物。科标检测研究院承接中药材及其他保健产品的有效成分和功效检测。为保健品的发展提供坚实的科学依据。在2014年帮助客户论文课题达到200余篇，为客户提供检测数据，检测方法，检测图谱等论文需要的资料。以下是高效液相色谱法测定甘草苷和甘草酸含量介绍：目的建立甘草苷和甘草酸的HPLC含量测定方法。该方法操作简便、准确，线性相关系数良好，且稳定性和重复性好，适用于甘草黄酮粗提物及纯化物中甘草苷和甘草酸的含量测定。经典的黄酮含量测定方法，是以芦丁为对照品，采用紫外分光光度法测定，但此

2、方法用于甘草黄酮的测定尚有诸多不足之处。甘草黄酮的主要成分甘草苷，是反映甘草黄酮内在质量的一个重要指标［6］。本研究以甘草苷为对照品，采用HPLC法测定甘草黄酮含量的方法，同时研究优化以HPLC测定甘草酸含量的方法，以期为甘草有效成分的综合开发利用和质量监控提供新的方法和思路。1仪器与材料1.1仪器：高效液相色谱仪；可变紫外检测器；万分之一天平；超声波清洗器。1.2材料甘草。甘草苷对照品、甘草酸单铵盐对照品；95%乙醇、冰醋酸、乙酸胺、甲醇（色谱纯）、乙腈（色谱纯）。2方法与结果2.1色谱分析条件2.1.1甘草苷检测条件色谱柱为KromasiL-C18（4.6mm×200mm，5μm）；流动

3、相为乙腈-0.5%醋酸（20∶80）；紫外检测波长：276nm；流速1.0ml·min-1；柱温为室温；进样量20μl。理论塔板数按甘草酸铵峰计算应不低于4000。对照品和甘草黄酮粗提物的色谱图见图1～2。2.1.2甘草酸检测条件色谱柱为KromasiL-C18（4.6mm×200mm，5μm）；流动相为甲醇-0.2mol·L-1乙酸铵溶液-冰醋酸（67∶32∶1）；紫外检测波长252nm；流速1.0ml·min-1；柱温为室温；进样量20μl。理论塔板数按甘草酸铵峰计算应不低于2000。2.2对照品及供试品溶液的配制2.2.1对照品溶液的配制取甘草苷和甘草酸单铵盐对照品适量，精密称定，用流

4、动相配制成浓度为54μg·ml-1的甘草苷对照品溶液和120μg·ml-1的甘草酸单铵盐对照品溶液。青岛科标检测研究院2.2.2供试品溶液的制备精密称取甘草黄酮提取物适量，用相应的流动相溶解，定溶于10ml量瓶中，作为甘草苷供试品溶液。精密称取甘草黄酮提取物适量，用相应的流动相溶解，定溶于10ml量瓶中，作为甘草酸供试品溶液。2.3检测波长的选择以流动相为参比溶液，在200～400nm波长范围内分别对甘草苷和甘草酸对照品溶液进行扫描，结果表明，甘草苷在276nm处有一最大吸收峰，甘草酸在252nm处有一最大吸收峰，所以选定276nm为甘草苷的检测波长，252nm为甘草酸的检测波长。2.4线性

5、关系的考察精密吸取甘草苷对照品储备液0.50，1.00，2.00，3.00，4.00，5.00ml于10ml量瓶中，用20%乙腈定容至刻度，摇匀；再精密吸取甘草酸单铵盐对照品储备液0.50，1.00，1.50，2.00，2.50，3.00ml于10ml量瓶中，用流动相定容至刻度，摇匀；分别按“2.1”项色谱条件进行测定，以峰面积A（μV·s）对进样浓度C（μg·ml-1）作回归统计，结果：甘草苷在2.7～27μg·ml-1范围内线性良好，回归方程：A=24962C7161.1，r=0.9997。甘草酸在6～36μg·ml-1范围内线性良好，回归方程为：A=23653C23125，r=0.99

6、98。2.5精密度实验取同一供试品溶液，重复进样6次，求得甘草苷的RSD为0.74%，甘草酸的RSD为0.92%，说明本方法精密度良好。2.6重复性实验按“2.2.2”项制备同一批号供试品溶液6份，按拟定的色谱条件分别测定甘草苷和甘草酸的含量，测得甘草苷的RSD为1.32%，甘草酸的RSD为1.04%，表明重复性较好。2.7稳定性实验配制同一供试品溶液，分别在0，2，4，6，8，10，12，24，36，48h后进样，求得甘草苷的RSD为1.44%，甘草酸的RSD为0.89%，表明样品溶液在48h内稳定。2.8回收率实验取已知含量的同一供试品溶液各5份，分别精密加入同一浓度同一体积的甘草苷对照

7、品溶液，甘草酸单铵盐对照品溶液，混匀，进样，按上述方法测定甘草酸和甘草苷的含量，测得甘草苷和甘草酸的平均回收率分别为101.4%，101.3%；RSD值分别为1.18%，1.22%。表明本实验所确定的HPLC法进行甘草苷和甘草酸的含量分析，准确度较高。结果见表1。表1甘草酸和甘草苷的回收率实验结果2.9样品测定分别精密称定甘草黄酮粗提物和纯化物各3份，适量，按“2.2.2”项方法制备所需的供试品溶液，按“2.