高效液相色谱法测定甘草苷和甘草酸含量的研究

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1、高效液相色谱法测定甘草苷和甘草酸含量的研究【摘要】目的建立甘草苷和甘草酸的HPLC含量测定方法。方法使用KromasiL-C18（4.6mm×200mm，5μm）柱，甘草苷采用乙腈-0.5%醋酸(20:80)为流动相，检测波长276nm，柱温为室温；甘草酸流动相为甲醇-0.2mol·L-1乙酸铵溶液-冰乙酸(67∶32∶1)，检测波长252nm，柱温为室温。二者流速均为1.0ml·min-1，采用外标法定量测定。结果甘草苷在2.7～27μg·ml-1范围内呈良好线性关系（r=0.9997）；甘草酸在6～36μg·ml-1范围内呈良好线性关系（r=0.9

2、998）；甘草苷和甘草酸的平均回收率分别为101.4%和101.3%，其RSD值分别为1.18%和1.22%。结论该方法操作简便、准确，线性相关系数良好，且稳定性和重复性好，适用于甘草黄酮粗提物及纯化物中甘草苷和甘草酸的含量测定。【关键词】高效液相色谱；甘草苷；甘草酸Abstract：ObjectiveToestablishmethodfordeterminationofliquiritinandglycyrrhizicacidbyHPLC.MethodsKromasil-C18column(4.6mm×200mm,5μm)edtemperaturea

3、ndthemobilephaseconsistedofacetonitrile-0.5%glacialaceticacid(20∶80),thedetection;HPLCanalysisglycyrrhizicacidedtemperatureandthemobilephaseconsistedofmethanol-0.2mol·L-1ammoniumacetate-glacialaceticacid(67∶32∶1),thedetection.Theflol·min-1.ResultsThelinearrangeofliquiritinl-1(r=

4、0.9997);thelinearrangeofglycyrrhizicacidl-1(r=0.9998);theaveragerecoveryofliquiritinandglycyrrhizicacidethodissimple,convenientstable,repeatableandaccurateinationofliquiritinandglycyrrhizicacidinextractionandpurificationoflicoriceflavonoid.KeyasiL-C18（4.6mm×200mm，5μm）；流动相为乙腈-0.5

5、%醋酸(20∶80)；紫外检测波长：276nm；流速1.0ml·min-1；柱温为室温；进样量20μl。理论塔板数按甘草酸铵峰计算应不低于4000。对照品和甘草黄酮粗提物的色谱图见图1～2。2.1.2甘草酸检测条件色谱柱为KromasiL-C18（4.6mm×200mm，5μm）；流动相为甲醇-0.2mol·L-1乙酸铵溶液-冰醋酸(67∶32∶1)；紫外检测波长252nm；流速1.0ml·min-1；柱温为室温；进样量20μl。理论塔板数按甘草酸铵峰计算应不低于2000。对照品和甘草黄酮粗提物分离的色谱图见图3～4。2.2对照品及供试品溶液的配制2.

6、2.1对照品溶液的配制取甘草苷和甘草酸单铵盐对照品适量，精密称定，用流动相配制成浓度为54μg·ml-1的甘草苷对照品溶液和120μg·ml-1的甘草酸单铵盐对照品溶液。2.2.2供试品溶液的制备精密称取甘草黄酮提取物适量，用相应的流动相溶解，定溶于10ml量瓶中,作为甘草苷供试品溶液。精密称取甘草黄酮提取物适量，用相应的流动相溶解，定溶于10ml量瓶中，作为甘草酸供试品溶液。2.3检测波长的选择以流动相为参比溶液，在200～400nm波长范围内分别对甘草苷和甘草酸对照品溶液进行扫描，结果表明，甘草苷在276nm处有一最大吸收峰，甘草酸在252nm处有

7、一最大吸收峰，所以选定276nm为甘草苷的检测波长，252nm为甘草酸的检测波长。2.4线性关系的考察精密吸取甘草苷对照品储备液0.50，1.00，2.00，3.00，4.00，5.00ml于10ml量瓶中，用20%乙腈定容至刻度，摇匀；再精密吸取甘草酸单铵盐对照品储备液0.50，1.00，1.50，2.00，2.50，3.00ml于10ml量瓶中，用流动相定容至刻度，摇匀；分别按“2.1”项色谱条件进行测定，以峰面积A（μV·s）对进样浓度C（μg·ml-1）作回归统计，结果：甘草苷在2.7～27μg·ml-1范围内线性良好，回归方程：A=24962

8、C+7161.1，r=0.9997。甘草酸在6～36μg·ml-1范围内线性良好，回归方程为：