基因工程 复习总结

《基因工程 复习总结》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在行业资料-天天文库。

1、总结第一章1.简述基因操作、基因重组和基因工程的关系。基因操作:对基因进行分离、分析、改造、检测、表达、重组和转移等操作的总称。基因工程:专指为实践应用而进行的基因重组事件，产生的基因工程体可以用作生物反应器，或改变了生物性状的工程体等。基因工程（基因操作）：主要是利用DNA重组技术，将生物的某个基因或一个DNA片段通过基因载体（DNA载体）运送到另一生物的活性细胞中，然后经过克隆（clone）和行使正常功能（表达），从而创造生物新品种或新物种的遗传学分子技术（从细菌到高等生物）。2.为什么说基

2、因工程是生物学和遗传学发展的必然产物？（1）基因的提出与基因和DNA关系的建立，为基因重组打下物质基础（2）DNA结构的阐明和DNA在生命活动中作用的认识，为基因操作打下了理论基础（3）基因操作技术的发展直接导致基因工程的诞生和发展（4）人们研究的热情和对基因工程产品的迫切需求，进一步推动了基因工程的快速发展3.简述基因的结构组成对基因操作的影响。(1)．基因及其产物的共线性(2)．基因及其产物的非共线性(3)．基因的重叠与基因的可变性(4)．启动子和终止子4.重组DNA技术包括哪些步骤分---

3、分离制备目的基因切---切割目的基因和载体接---目的基因与载体连接转---将重组DNA导入宿主细胞筛---筛选并检定含有重组DNA分子的受体细胞克隆表---克隆基因在受体细胞中进行复制与表达5.基因工程的流程目的基因的分离制备→与载体体外重组→遗传转化→转化子筛选→提取目的基因→测序↓获得优良品种←表达特定蛋白产物←导入宿主细胞←将目的基因克隆到表达载体6.基因工程中所用酶类及作用特点(1)限制性核酸内切酶：在DNA分子内部的特异性的碱基序列内部进行切割(2)DNA连接酶：将两条以上的线性DN

4、A分子或片段催化形成磷酸二酯键连接成一个整体(3)DNA聚合酶I：通过向3’端逐一增加核苷酸以填补双链DNA分子上的单链裂口，即5’→3’DNA聚合酶活性与3’→5’及5’→3’外切酶活性(4)KlenowDNA聚合酶:是从全酶中除去5′―3′外切活性的肽段后的大片段肽段，而聚合活性和3′―5′外切活性不受影响。(5)反转录酶:以RNA或DNA链为模板合成互补的cDNA链(6)DNA末端转移酶:将寡聚物尾巴加到了线性双链或单链DNA分子的3’－OH末端或DNA的3’－末端(7)碱性磷酸酶:去除D

5、NA,RNA,dNTP的5’磷酸基团(8)降解酶S1:降解单链DNA或RNA,产生带5’磷酸的单核苷酸或寡聚核苷酸，同时也可切割双链核酸分子的单链(9)TaqDNA聚合酶：能在高温（72℃）下以单链DNA为模板，从5’→3’方向合成新的互补链。（10）多核苷酸激酶：催化将把一个磷酸分子加到多核苷酸链的5’－OH末端上（11）核酸外切酶III:降解DNA3’－OH末端的核苷酸残基（12）脱氧核糖核酸酶：内切核酸酶，水解单链或双链DNA7.常用的目的基因的获取方法构建基因组文库；构建cDNA文库；人

6、工合成DNA技术；PCR扩增8.碱裂解法提取质粒原理高pH使质粒DNA和染色体DNA变性，同时沉淀蛋白质。再将pH值调至中性，质粒DNA较小，很容易复性成双链。而染色体DNA较大，不会复性，缠结成网状不溶物质，从而可以通过离心除去。9.常用的目的基因与载体的连接方法（1）黏性末端连接：将靶基因DNA片段和载体DNA经过相同的限制酶进行切割，使他们两端产生相同的黏性末端，然后经黏性末端碱基配对和DNA连接酶的作用，共价连接成为新的重组DNA分子。（2）平头末端连接:将平末端的DNA分子在T4连接酶

7、的作用下，催化DNA5′磷酸基与3′羟基之间形成磷酸二酯键相互连接。（3）人工接头法：利用人工接头加在平端的DNA片段的两端，然后用相应的限制酶切割人工接头以产生黏性末端，再与带有相同黏性末端的载体进行连接。（4）同源多聚尾连接法：在末端脱氧核苷酸转移酶催化下，在线性载体分子的两端加上单一核苷酸如dG组成的多聚尾，而在目的基因的分子两端加上dC多聚尾，两者混合退火，然后经DNA聚合酶I或)KlenowDNA聚合酶填补裂口处缺失的核苷酸，再通过DNA连接酶修复成环状的双链DNA。第二章1.什么是细

8、菌的限制－修饰系统，其功能是什么？细胞中存在位点特异性限制酶和特异性甲基化酶，即细胞中有限制—修饰系统(R-MRestriction-modificationsystem)。R-M系统是细菌安内御外的积极措施。限制作用就是限制酶降解外源DNA，维护宿主遗传稳定性的机制。甲基化是常见的修饰作用，可使腺嘌呤A成为N6甲基-腺膘呤，胞嘧啶C成为5‘甲基胞嘧啶。修饰作用是通过甲基化酶来的甲基化作用，是宿主细胞能识别自身遗传物质和外来遗传物质的机制。2.说明限制性内切核酸酶命名原则（举例）。3.限制内切核