基因工程期末复习总结

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1、一、单选1、第一个实现DNA重组的实验：1972年，美国斯坦福大学医学中心的P.Berg在世界上第一次成功地实现了DNA的体外重组。2、第一次实现重组体转化成功的实验：1973年，科恩（Coher）和博耶（Boyer）建立的基因工程基本模式。3、基因工程研究的主要内容：切接转增检。4、基因工程研究的基本要素：基因、工具酶、载体、受体细胞。5、DNA在生物体内的存在状态：染色体DNA、病毒DNA（噬菌体DNA）、质粒DNA、线粒体DNA利叶绿体DNA,有的以线型存在，有的以环状存在。6、天然DNA提取的步骤：生物材料的准备、裂解细胞、分离抽提DNAo7、DNA的分离抽提法

2、：酚■氯仿抽提法（常用、经典）。8、DNA的保存：温度越低越好，同等条件下，温度越低越不容易降解。9、为了消除在制备RNA过程中RNA酶的污染，应用0.1%DEPC处理过的水配制试剂。10、人工合成DNA片段的方法有化学合成法和聚合酶链式反应扩增法。口、紫外分光光度法检测核酸样品的纯度（常用），纯净的核酸溶液的OD260/OD280值应为1.7-2.0,OD260/OD230值应大于2.0,如果OD260/OD280小于1.7,可能有蛋白质污染，如果OD260/OD280大于2.0或OD260/OD23o小于2.0时，核酸溶液中可能存在其他干扰物质。12、工具酶就其用途

3、而言可分为三大类：限制性内切酶、连接酶和修饰酶。基因工程屮最常用的工具酶酶主要用途限制性核酸内切酶识别DNA特定序列.切断DNA链DNA聚合酶I或其大片段（Klenow）①缺口平移制作标记DNA探针②合成CDNA的第二链③填补双链DNA3*凹端④DNA序列分析耐热DNA聚合酶（TaqDNA聚合酶等）聚合酶链反应（PCR）DNA连接酶连接两个DMA分子或片段多核幵酸激酶催化多核幵梭5,轻基末端磷酸化，制备末端标记探针末端转移菌在V末端加入同质多聚物尾SI核酸酶.绿豆核酸酶降解单•链DNA或RNA,使双链DNA突出端变为平端DNA熔酶I降解DNA,在双链DNA上产生随机切口

4、RNA酶A降解除RNA磷酸酶切除核酸末端硯酸基14、通常提到的限制性核酸内切酶主要指II类酶而言，限制性核酸内切酶的命名：属名+种名。例如：BacillusamyloliquefaciensH、HaemophilusinfluenzaedBamH>HindIo“属种株序”15、限制性内切核酸酶的本质：细菌细胞的限制一修饰系统。16、限制性内切核酸酶的作用机制识别双链DNA中特定的核昔酸17、常用的酶切方法：单酶切、双酶切和部分酶切。18、承载外源DNA的大小排序:质粒(<20kb)<噬菌体(20-30kb)

5、000kb)。19、受体细胞的种类:1)原核生物细胞例：大肠杆菌；枯草芽抱杆菌；蓝细菌；2)真核生物细胞包含酵母细胞、植物细胞、动物细胞。19、常用于分了杂交的探针标记物可分为放射性及非放射性两大类，非放射性探针包括生物素标记探针、地高辛标记探针、荧光素标记探针。20、根据待测核酸的来源以及将其分子结合到固相支持物上的方法的不同，核酸分子杂交检测法可分为菌落印迹原位杂交、斑点印迹杂交、Southern印迹杂交(DNA)和Nothern印迹杂交(RNA)四类。(PS:如果只要检测克隆菌株、动植物细胞株或转基因个体、器官、组织提取的总DNA或RNA样品中是否含有日的基因，则

6、可采用斑点印迹杂交(dotblotting)或狭线印迹杂交(slotblotting)进行检测。菌落(或噬菌斑)原位杂交是直接把菌落或噬菌斑印迹转移到用于杂交的膜上，经溶菌和变性处理后使DNA暴露出来并与滤膜原位结合,再用DNA探针与其杂交。)21、重组子筛选的方法：1)遗传表里直接筛选2)依赖于重组子结构特征分析筛选3)核酸分子杂交分析4)免疫化学分析检测5)PCR筛选法。22、重组基因导入受体细胞的方法:C評(诱导大肠杆菌)转化法、电激穿孔、基因枪法、显微注射法、病毒转染法二、名词解释1、多克隆位点（MCS）：是包含多个（最多20个）限制性酶切位点的一段人工DNA序

7、列。2、衔接头：化学合成的寡核昔酸，含有一种以上的限制性核酸内切酶识别序列。其一端或两端具有一种或两种内切酶切割产生的黏性末XL1J炳。3、限制性内切核酸酶：识别双链DNA中特定的核昔酸序列（识别序列），并在识别序列上使每条链的一个磷酸二酯键断开的一类酶，简称限制酶。4、回文序列：DNA片段上的一段所具有的反向互补序列，常是限制性酶切位点。5、同裂酶：识别相同序列的限制性内切酶称为同裂酶。它们的切割位点可能不同6、同尾酶：切割不同的DNA片段，但产生相同的粘性末端的一类限制性内切酶。7、星性活性：在极端非标准条件下，限制酶能切割与识别序列