低温保护剂对4℃保存猪精液的活率影响

《低温保护剂对4℃保存猪精液的活率影响》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在行业资料-天天文库。

1、低温保护剂对4℃保存猪精液的活率影响孙时军作者简介：孙时军，高级畜牧师，主要研究方向为动物遗传育种*通讯作者：罗松，硕士研究生，主要研究方向为动物营养。邮箱：lsbjx@163.com，电话：15258220640基金项目：宁波市鄞州区农业科研攻关项目，朱华鸿2，陈晓峰3，俞颂东，李俊婷1，罗松1*，冯梦31.浙江省宁波市鄞州区畜牧兽医站，浙江宁波，315100；2.浙江省宁波市鄞州区咸祥镇畜牧兽医站，浙江宁波，315141；3.浙江宁波福宁种猪有限公司，浙江宁波，315141；摘要：本实验采用1%浓度的甘油、乙二醇、二甲基乙酰胺、二甲亚砜作为精液低温保护剂，通过精子降温-冷藏

2、-复苏三个重要步骤，观察第七天保护剂对精子活率的影响。结果表明：在4℃下，乙二醇对精子活率保护作用最好，第7天仍能达到0.6以上，其次是甘油、二甲基乙酰胺和二甲亚砜组，空白对照组活率最低，低于0.2。关键字：低温保护剂；猪精液；精子活率；复苏家畜精液保存技术是二十世纪随着人工授精技术广泛应用而产生的，原理是通过降低或抑制精子新陈代谢程度达到延长精子在体外寿命的目的。为此，研究者试验将精液放在低温状态(非结冰)或冷冻(结冰)状态下保存。精液低温保存通常是在0～5℃范围施行，这是在冷冻保存以前常用的方法。据报道，在脱脂乳中加甘油10％～13％用于稀释牛精液，在低温下可保存14天仍具

3、有很高的受精能力；在含有咖啡因6～10mg的脱离子缓冲溶液中保存牛精子，在6～7℃时，最长能维持生存时间达519小时。低温保存精液的局限性仍很大，当冷冻保存技术成熟以后，已很少再使用和研究，另一方面，与牛精液相比，猪精液对低温更敏感，因此，至今仍没有成熟稳定的低温保存猪精液的方法。理论上来说，低温下精子代谢活动水平更低，保存时间比常温下长的多。同时可应用普通冰箱保存，生产运输成本和操作技术与常温精液基本相同，对于多数人工授精站无需增加设备及专业人员，则可较大副度地提升优良种畜利用度，扩展供精范围，具有很广的应用前景。本实验首次对猪带浆精液在4℃条件下，四种低温保护剂对精子活率的

4、影响进行研究，以期为低温保存精液探索可行之路。1.材料及方法1.1精液采集采集一头20月龄的宁波福宁种猪有限公司的杜洛克种公猪精液。使用手握采精法收集富含精子的部分（共采集到200ml），滤纸过滤，并收集到消毒后的保温瓶中，立即拿进室温为25℃的室内。1.1精液稀释液配制使用亚卫牌精液稀释剂作为基础稀释剂，新鲜精液按照1:1比例稀释，冷冻保护剂按照表1所列进行配比稀释并装瓶。试验共设4个实验组，1个对照组，每组三个重复。表1各组低温保护剂添加量及浓度序号冷冻保护剂添加量（ul）稀释精液（ml）保护剂浓度1甘油200201%2乙二醇200201%3二甲基乙酰胺200201%4二甲

5、亚砜200201%5空白对照组0200%1.2休眠和复苏程序预置隔热效果好的泡沫箱，加入35℃的温水适量，将装瓶精液放入泡沫箱中，并固定好，盖好泡沫盖，并用厚毛巾包裹好泡沫箱，放入4℃冰箱。以后每天两次，在冰箱中轻轻摇晃精液瓶，以防精子沉淀死亡。第七天，观察精子前，将精液瓶放入35℃恒温水浴锅中，静置30分钟。1.3数据统计采用完全随机设计，使用Excel（2003）处理数据，用SPSS(16.0)统计软件对数据进行单因子方差分析及LSD法多重比较，所有数据均以平均数±标准误表示。1.结果表2各处理组精子活率比较组别12345精子活率0.59±0.017dc0.62±0.014

6、d0.54±0.023c0.39±0.020b0.18±0.044a注：肩注字母含相同小写字母表示两者差异不显著(P>0.05)；不同小写字母表示差异显著(P<0.05)。由表2可以看出，乙二醇组效果最好，复苏后活率仍能达到0.6以上，和二甲基乙酰胺、二甲亚砜及空白对照组均差异显著；甘油组次之，活率率低于0.6，和二甲亚砜及空白对照组差异显著；二甲基乙酰胺组活率率高于0.5，和乙二醇、二甲亚砜及空白对照组差异显著；二甲亚砜组精子活率约为0.4，和其他四组均差异显著；空白组活率低于0.2，和其他四组均差异显著。1.讨论3.1猪精液低温保存的可行性由于猪精子对低温较马和牛等其他家畜

7、更为敏感，耐受能力差，容易发生冷休克等特点，使得猪精液低温保存技术的研究进展较为缓慢。DeIeeuw提出，随着温度的降低，精子质膜的磷脂由液相转变为胶相，使膜的通透性变强，导致精子内部的阳离子和酶外漏，及膜控制酶活性和扩散能力的降低，致使精子的获能、顶体反应及死亡[1]。Ahhouse等研究发现，低于12℃，精子的存活时间和活率均急剧下降[2]。但Funahashia等在10℃条件下稀释保存猪精液9天后，精子仍具有较高的活率和体外穿透卵子的能力[3]；徐振军等用糖类，卵黄和柠檬酸钠配制的稀释