人基质金属蛋白酶9(mmp-9)elisa试剂盒说明书

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1、人基质金属蛋白酶9/明胶酶B(MMP-9/GelatinaseB)酶联免疫吸附测定试剂盒使用说明书厦门慧嘉生物科技有限公司本试剂盒仅供体外研究使用、不用于临床诊断!预期应用ELISA法定量测定人血清、血浆或其它相关生物液体中MMP-9含量。实验原理用纯化的MMP-9抗体包被微孔板，制成固相载体，往微孔中依次加入标本或标准品、生物素化的MMP-9抗体、HRP标记的亲和素，经过彻底洗涤后用底物(TMB)显色。TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的MMP-9呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（值），计算样品浓度。

2、试剂盒组成及试剂配制1、酶标板：一块（96孔）2、标准品（冻干品）：2瓶，请临用前15分钟内配制。每瓶以样品稀释液稀释至1ml，盖好后室温静置大约10分钟，同时反复颠倒/搓动以助溶解，其浓度为5,000pg/ml，然后做系列倍比稀释（注：不要直接在板中进行倍比稀释），分别配制成5,000pg/ml，2,500pg/ml，1,250pg/ml，625pg/ml，312pg/ml，156pg/ml，78pg/ml，样品稀释液直接作为空白孔0pg/ml。如配制2,500pg/ml标准品：取0.5ml（不要少于0.5ml）5,000pg/ml的上述标准品加入含有0.5ml样品稀

3、释液的Eppendorf管中，混匀即可，其余浓度以此类推。3、样品稀释液：1×20ml。4、检测稀释液A：1×10ml。5、检测稀释液B：1×10ml。6、检测溶液A：1×120/瓶（1:100）。临用前以检测稀释液A1:100稀释（如：10检测溶液A/990检测稀释液A），充分混匀，稀释前根据预先计算好的每次实验所需的总量配制（100/孔），实际配制时应多配制0.1-0.2ml。7、检测溶液B：1×120/瓶（1:100）。临用前以检测稀释液B1:100稀释。稀释方法同检测溶液A。8、底物溶液：1×10ml/瓶。9、浓洗涤液：1×30ml/瓶，使用时每瓶用蒸馏水稀释2

4、5倍。10、终止液：1×10ml/瓶（2mol/LH2SO4）。11、覆膜：5张12、使用说明书：1份自备物品1、酶标仪（建议仪器使用前提前预热）2、微量加液器及吸头，EP管3、蒸馏水或去离子水，滤纸标本的采集及保存1、血清：全血标本请于室温放置2小时或4过夜后于1000g离心20分钟，取上清即可检测，或将上清置于-20或-80保存，但应避免反复冻融。2、血浆：可用EDTA或肝素作为抗凝剂，标本采集后30分钟内于1000g离心15分钟，取上清即可检测，或将上清置于-20或-80保存，但应避免反复冻融。3、其它生物标本：请1000g离心20分钟，取上清即可检测，或将上清置

5、于-20或-80保存，但应避免反复冻融。4、样本处理：血清或血浆标本推荐稀释100-200倍。标本使用0.1M的PBS稀释（PH=7.0-7.2）。注：以上标本均应密封保存，4保存应小于1周，-20不应超过1个月，-80不应超过2个月；标本溶血会影响最后检测结果，因此溶血标本不宜进行此项检测。操作步骤实验开始前，各试剂均应平衡至室温，试剂不能直接在37溶解；试剂或样品配制时，均需充分混匀，混匀时尽量避免起泡。实验前应预测样品含量，如样品浓度过高时，应对样品进行稀释，以使稀释后的样品符合试剂盒的检测范围，计算时再乘以相应的稀释倍数。1、加样：分别设空白孔、标准孔、待测样品

6、孔。空白孔加样品稀释液100，余孔分别加标准品或待测样品100，注意不要有气泡，加样时将样品加于酶标板底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀，酶标板加上盖或覆膜，37温育2小时。为保证实验结果有效性，每次实验请使用新的标准品溶液。2、弃去液体，甩干，不用洗涤。每孔加检测溶液A工作液100（临用前配制），酶标板加上覆膜，37温育1小时。3、弃去孔内液体，甩干，洗板3次，每次浸泡1-2分钟，大约400/每孔，甩干（也可轻拍将孔内液体拍干）。4、每孔加检测溶液B工作液（临用前配制）100，加上覆膜，37温育1小时。5、弃去孔内液体，甩干，洗板5次，方法同步骤3。6、每孔加底物溶液

7、90，酶标板加上覆膜37避光显色（反应时间控制在15-30分钟，当标准孔的前3-4孔有明显的梯度蓝色，后3-4孔梯度不明显时，即可终止）。7、每孔加终止溶液50，终止反应，此时蓝色立转黄色。终止液的加入顺序应尽量与底物液的加入顺序相同。8、立即用酶标仪在450nm波长测量各孔的光密度（值）。注：1、试剂准备：所有试剂在使用前应平衡至室温，使用后请立即按照说明书要求保存试剂。实验操作中请使用一次性的吸头，避免交叉污染。2、加样：加样或加试剂时，第一个孔与最后一个孔加样之间的时间间隔如果太大，将会导致不同的“预温育”时间，从而明显地影响到测量