人基质金属蛋白酶-9(MMP-9)

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'人基质金属蛋白酶-9(MMP-9)'
人基质金属蛋白酶-9(MMP-9)酶联免疫检测试剂盒使用说明书使用前仔细阅读本说明书。本酶联免疫试剂盒是基于双抗体夹心技术原理,来检测人基质金属蛋白酶-9(MMP-9),只能用于研究用途,不得用于医学诊断。用 途: 用于人血清、血浆及相关液体样本中基质金属蛋白酶-9(MMP-9)的测定。工作原理本试剂盒采用的是双抗体夹心酶联免疫吸附法(ELISA)测定样品中人基质金属蛋白酶-9(MMP-9)的水平。向预先包被了人基质金属蛋白酶-9(MMP-9)单克隆抗体的酶标孔中加入基质金属蛋白酶-9(MMP-9),温育;洗涤后,加入HRP标记过的基质金属蛋白酶-9(MMP-9)抗体。再经过温育和洗涤,去除未结合的酶,然后加入底物A、B,产生蓝色,并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅与样品中人基质金属蛋白酶-9(MMP-9)的浓度呈正相关。试剂盒组成 1标准品(1600μg/L)0.5ml7显色剂A液6ml2标准品稀释液3ml8显色剂B液6ml3酶标包被板12孔×8条9终止液6ml4酶标试剂6ml10说明书1份530倍浓缩洗涤液20ml11封板膜2张6样品稀释液6ml12密封袋1个需要而未提供的试剂和器材1. 37℃恒温箱。2. 标准规格酶标仪。3. 精密移液器及一次性吸头4. 蒸馏水,5. 一次性试管6. 吸水纸注意事项1. 从2-8℃取出的试剂盒,在开启试剂盒之前要室温平衡至少30分钟。酶标包被板开封后如未用完,板条应装入密封袋中保存。2. 各步加样均应使用加样器,并经常校对其准确性,以避免试验误差3. 建议所有标准品、样本都做双份检测。如标本中待测物质含量过高,请先用样品稀释液稀释一定倍数(n倍)后再按说明书操作进行测定,计算时请最后乘以总稀释倍数(×n×5)。4. 严格按照说明书的操作进行,试验结果判定必须以酶标仪读数为准.5. 为避免交叉污染,要避免重复使用手中的吸头和封板膜。6. 不用的其它试剂应包装好或盖好。不同批号的试剂不要混用。保质前使用。7. 底物B对光敏感,避免长时间暴露于光下。洗板方法手工洗板方法:甩掉酶标板内的液体;在实验台上铺垫几层吸水纸,酶标板朝下用力拍几次;将稀释后的洗涤液至少0.35ml注入孔内,浸泡1-2分钟。根据需要,重复此过程数次。自动洗板:如果有自动洗板机,应在熟练使用后再用到正式实验过程中标本要求 1.不能检测含NaN3的样品,因NaN3抑制辣根过氧化物酶的(HRP)活性。2.标本采集后尽早进行提取,提取按相关文献进行,提取后应尽快进行实验。若不能马上进行试验,可将标本放于-20℃保存,但应避免反复冻融操作程序1. 标准品的稀释:(本试剂盒提供原倍标准品一支,用户请按照说明自行在小试管中倍比稀释):800 μg/L(5号标准品)120μl的原倍标准品加入120μl的标准品稀释液400μg/L(4号标准品)120μl的5号标准品加入120μl的标准品稀释液200μg/L(3号标准品)120μl的4号标准品加入120μl的标准品稀释液100μg/L(2号标准品)120μl的3号标准品加入120μl的标准品稀释液50μg/L(1号标准品)120μl的2号标准品加入120μl的标准品稀释液2. 分别设空白孔(空白对照孔不加样品及酶标试剂,其余各步操作相同)、标准品孔、待测样品孔。在酶标包被板上标准品孔中加入稀释好的标准品50μl;在酶标包被板上待测样品孔中先加样品稀释液40μl,然后再加待测样品10μl(样品最终稀释度为5倍)。轻轻晃动混匀,37℃温育30分钟。 3. 弃去液体,甩干,每孔加满30倍稀释后洗涤液,振荡30秒,甩去洗涤液,用吸水纸拍干。如此重复5次,拍干。4. 每孔加入酶标试剂50μl,空白孔除外。轻轻晃动混匀,37℃温育30分钟。 5. 弃去液体,甩干,每孔加满30倍稀释后洗涤液,振荡30秒,甩去洗涤液,用吸水纸拍干。如此重复5次,拍干。6. 每孔先加入显色剂A50μl,再加入显色剂B50μl,轻轻震荡混匀,37℃避光显色10分钟.7. 取出酶标板,每孔加终止液50μl,终止反应(此时蓝色立转黄色)。8. 测定:以空白孔调零,在450nm波长下测量各孔的吸光度值(OD值)。 测定应在加终止液后15分钟以内进行。9. 根据标准品的浓度及对应的OD值计算出标准曲线的直线回归方程,再根据样品的OD值在回归方程上计算出对应的样品浓度。也可以使用各种应用软件来计算。应记住由于样品稀释了的,其实际浓度应该乘以总稀释倍数。操作程序总结:准备试剂,样品和标准品 加入准备好的样品和标准品,37℃反应30分钟洗板5次,加入酶标试剂,37℃反应30分钟洗板5次,加入显色液A、B,37℃显色10分钟加入终止液15分钟之内读OD值计算检测范围:1000μg/L→30μg/L。规格: 96人/盒保存: 2-8℃ 有效期: 6个月(2-8℃)。
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