人基质金属蛋白酶-9(MMP-9)

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1、人基质金属蛋白酶-9（MMP-9）酶联免疫检测试剂盒使用说明书使用前仔细阅读本说明书。本酶联免疫试剂盒是基于双抗体夹心技术原理，来检测人基质金属蛋白酶-9（MMP-9），只能用于研究用途，不得用于医学诊断。用途：用于人血清、血浆及相关液体样本中基质金属蛋白酶-9（MMP-9）的测定。工作原理本试剂盒采用的是双抗体夹心酶联免疫吸附法（ELISA）测定样品中人基质金属蛋白酶-9（MMP-9）的水平。向预先包被了人基质金属蛋白酶-9（MMP-9）单克隆抗体的酶标孔中加入基质金属蛋白酶-9（MMP-9），温育；洗涤后，

2、加入HRP标记过的基质金属蛋白酶-9（MMP-9）抗体。再经过温育和洗涤，去除未结合的酶，然后加入底物A、B，产生蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅与样品中人基质金属蛋白酶-9（MMP-9）的浓度呈正相关。试剂盒组成1标准品（1600μg/L）0.5ml7显色剂A液6ml2标准品稀释液3ml8显色剂B液6ml3酶标包被板12孔×8条9终止液6ml4酶标试剂6ml10说明书1份530倍浓缩洗涤液20ml11封板膜2张6样品稀释液6ml12密封袋1个需要而未提供的试剂和器材1．37℃恒温箱。2．标准规

3、格酶标仪。3．精密移液器及一次性吸头4．蒸馏水，5．一次性试管6．吸水纸注意事项1．从2-8℃取出的试剂盒，在开启试剂盒之前要室温平衡至少30分钟。酶标包被板开封后如未用完，板条应装入密封袋中保存。2．各步加样均应使用加样器，并经常校对其准确性，以避免试验误差3．建议所有标准品、样本都做双份检测。如标本中待测物质含量过高，请先用样品稀释液稀释一定倍数（n倍）后再按说明书操作进行测定，计算时请最后乘以总稀释倍数（×n×5）。1．严格按照说明书的操作进行，试验结果判定必须以酶标仪读数为准.2．为避免交叉污染，要避免

4、重复使用手中的吸头和封板膜。3．不用的其它试剂应包装好或盖好。不同批号的试剂不要混用。保质前使用。4．底物B对光敏感，避免长时间暴露于光下。洗板方法手工洗板方法：甩掉酶标板内的液体；在实验台上铺垫几层吸水纸，酶标板朝下用力拍几次；将稀释后的洗涤液至少0.35ml注入孔内，浸泡1-2分钟。根据需要，重复此过程数次。自动洗板：如果有自动洗板机，应在熟练使用后再用到正式实验过程中标本要求1．不能检测含NaN3的样品，因NaN3抑制辣根过氧化物酶的（HRP）活性。2．标本采集后尽早进行提取，提取按相关文献进行，提取后应

5、尽快进行实验。若不能马上进行试验，可将标本放于-20℃保存，但应避免反复冻融操作程序1．标准品的稀释：（本试剂盒提供原倍标准品一支，用户请按照说明自行在小试管中倍比稀释）：800μg/L（5号标准品）120μl的原倍标准品加入120μl的标准品稀释液400μg/L（4号标准品）120μl的5号标准品加入120μl的标准品稀释液200μg/L（3号标准品）120μl的4号标准品加入120μl的标准品稀释液100μg/L（2号标准品）120μl的3号标准品加入120μl的标准品稀释液50μg/L（1号标准品）120

6、μl的2号标准品加入120μl的标准品稀释液2．分别设空白孔（空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同）、标准品孔、待测样品孔。在酶标包被板上标准品孔中加入稀释好的标准品50μl；在酶标包被板上待测样品孔中先加样品稀释液40μl，然后再加待测样品10μl（样品最终稀释度为5倍）。轻轻晃动混匀，37℃温育30分钟。3．弃去液体，甩干，每孔加满30倍稀释后洗涤液，振荡30秒，甩去洗涤液，用吸水纸拍干。如此重复5次，拍干。4．每孔加入酶标试剂50μl，空白孔除外。轻轻晃动混匀，37℃温育30分钟。5．弃去液体，

7、甩干，每孔加满30倍稀释后洗涤液，振荡30秒，甩去洗涤液，用吸水纸拍干。如此重复5次，拍干。6．每孔先加入显色剂A50μl，再加入显色剂B50μl，轻轻震荡混匀，37℃避光显色10分钟.7．取出酶标板，每孔加终止液50μl，终止反应（此时蓝色立转黄色）。8．测定：以空白孔调零，在450nm波长下测量各孔的吸光度值（OD值）。测定应在加终止液后15分钟以内进行。9．根据标准品的浓度及对应的OD值计算出标准曲线的直线回归方程，再根据样品的OD值在回归方程上计算出对应的样品浓度。也可以使用各种应用软件来计算。应记住由

8、于样品稀释了的，其实际浓度应该乘以总稀释倍数。操作程序总结：准备试剂，样品和标准品加入准备好的样品和标准品，37℃反应30分钟洗板5次，加入酶标试剂，37℃反应30分钟洗板5次，加入显色液A、B，37℃显色10分钟加入终止液15分钟之内读OD值计算检测范围：1000μg/L→30μg/L。规格：96人/盒保存：2-8℃有效期：6个月（2-8℃）。