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《小鼠早期胚发育全程微分干涉差显微观察_论文》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在学术论文-天天文库。
1、小鼠早期胚发育全程微分干涉差显微观察【摘要】目的对小鼠早期胚发育全程进行系统的微分干涉差显微观察并制成图谱。方法通过体外受精和体内受精方法获得小鼠卵母细胞和早期胚胎,利用倒置微分干涉差显微镜观察排卵前卵母细胞至扩展囊胚的早期胚发育全过程,数码显微摄影系统拍照。结果记录排卵前卵母细胞至扩展囊胚的小鼠早期胚发育全过程,制成微分干涉差显微图谱。结论微分干涉差显微镜观察卵母细胞和各阶段早期胚,立体感强，对比度适当,可以准确生动地显示微细结构,所形成的图谱可供胚胎培养与操作借鉴。【关键词】小鼠;胚胎发育;微分干涉差显微术ABSTRACT:ObjectiveToobserv
2、esystematicallyandsetuptheatlasofthewholedevelopmentalprocessofmousepreimplantationembryonicoocytewithdifferentialinterferencecontrast(DIC)microscopy(DIC).MethodsMouseoocytesandpreimplantationembryoswerederivedfrominvitroorinvivofertilization.Thefulldevelopmentalstagesfrompreovulator
3、yoocytetoexpandedblastocystofmouseembryoswereobservedbyinvertedDICmicroscope,andphotosweretakenby12/12digitalmicrophotography.ResultsADICatlasofpreimplantationembryosinfulldevelopmentalstageswasformedfrompreovulatoryoocytetoexpandedblastocyst.ConclusionDICtechniqueofferedastereoandfi
4、neimageofcell/embryoindifferentstages.Theatlasmadefromthisobservationcanbeusedforreferencetothosewhoneedstocultureandmanipulatemouseembryos.KEYWORDS:mice;embryonicdevelopment;differentialintereferenceconstrastmicroscopy随着功能基因组学时代的到来,转基因小鼠、基因打靶(尤其是其中的基因敲除)小鼠、克隆小鼠技术和小鼠胚胎干细胞工程等,已经成为生命科学
5、各前沿领域普遍采用的研究手段。在这些研究中,使用微分干涉差显微镜(differentialinterferencecontrastmicroscope,DIC)技术，对小鼠的早期胚进行细致的观察与操作是不可或缺的关键步骤［1］。笔者对小鼠体内发育或体外受精形成的早期胚各个阶段,用DIC显微镜进行系统观察并实时摄影,形成小鼠早期胚发育全过程图谱,为推广小鼠胚胎操作技术,促进基因功能研究提供实用的基础资料。1材料与方法材料12/12动物SPF级ICR小鼠,3周龄雌鼠,体质量15~18g;性成熟雌鼠、雄鼠,体质量30~35g［上海斯莱克实验动物有限责任公司,许可证号:
6、SCXK(沪)2017-0003］,雌鼠52只,雄鼠12只。主要试剂孕马血清（PMSG1000IU/瓶,杭州动物药品厂);人绒毛膜促性腺激素（hCG1000IU/瓶）,丽珠集团丽珠制药厂);M2培养基、M16培养基:参照文献［1］配制;KSOM＋AA培养基［2］(EmbryoMax,美国Chemicon公司);矿物油(EmbryoCultureTested,M-8410,美国Sigma公司)。主要仪器倒置显微操作系统(TE-2000U型,日本Nikon公司);数码显微摄影系统(DP-70型,日本Olympus公司);三气培养箱(3131型,美国Thermo公司)
7、;体视显微镜(SZX7型,日本Olympus公司);双人单面净化工作台(SW-CJ-1Cu型,苏州净化设备有限公司)。方法小鼠超数排卵选用3周或性成熟ICR雌鼠为供卵/胚鼠。用于体外受精的小鼠于第1天17-18时腹腔注射PMSGIU,48h后腹腔注射hCGIU,待用;用于体内受精的ICR雌鼠于第1天12时左右腹腔注射PMSGIU,48h后腹腔注射hCG12/12IU,熄灯(20时)前与性成熟雄鼠合笼,自然交配,第4天8时左右检查雌鼠,选有阴道栓者待用。排卵前卵母细胞采集与处理选取经超数排卵后而未受精的雌鼠,断颈处死,从腰背部打开腹腔,取出卵巢,在M2培养液中用解
8、剖针刺破卵巢上突出的卵泡
