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《小鼠早期胚发育全程微分干涉差显微观察》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在应用文档-天天文库。
1、小鼠早期胚发育全程微分干涉差显微观察【摘要】目的对小鼠早期胚发育全程进行系统的微分干涉差显微观察并制成图谱。方法通过体外受精和体内受精方法获得小鼠卵母细胞和早期胚胎,利用倒置微分干涉差显微镜观察排卵前卵母细胞至扩展囊胚的早期胚发育全过程,数码显微摄影系统拍照。结果记录排卵前卵母细胞至扩展囊胚的小鼠早期胚发育全过程,制成微分干涉差显微图谱。结论微分干涉差显微镜观察卵母细胞和各阶段早期胚,立体感强，对比度适当,可以准确生动地显示微细结构,所形成的图谱可供胚胎培养与操作借鉴。【关键词】小鼠;胚胎发育;微分干涉差显微术ABSTRACT:ObjectiveToobservesyste
2、maticallyandsetuptheatlasoftheentalprocessofmouseprEimplantationembryonicoocyteicroscopy(DIC).MethodsMouseoocytesandprEImplantationembryosinvitroorinvivofertilization.Thefulldevelopmentalstagesfrompreovulatoryoocytetoexpandedblastocystofmouseembryosicroscope,andphotosicrophotography.Result
3、sADICatlasofpreimplantationembryosinfulldevelopmentalstagesedfrompreovulatoryoocytetoexpandedblastocyst.ConclusionDICtechniqueofferedastereoandfineimageofcell/embryoindifferentstages.Theatlasmadefromthisobservationcanbeusedforreferencetothoseanipulatemouseembryos.KEYSG1000IU/瓶,杭州动物药品厂);人绒毛
4、膜促性腺激素（hCG1000IU/瓶）,丽珠集团丽珠制药厂);M2培养基、M16培养基:参照精子与透明带的相互作用在体外受精实验进行授精培养2h左右,在倒置显微镜下检查，见卵丘颗粒细胞完全散开,透明带暴露明显时即将卵子吸出,吹吸数次，除去粘附精子，以4%甲醛固定至精子制动后置于DIC显微镜观察;体外受精结果的检查,从移入KSOM时,即授精培养6h(hCG后23~24h)起观察单细胞受精卵;排卵前卵母细胞或体内受精的早期胚,从解剖获取细胞/胚胎起观察,此后于连续实验过程的每天上午、下午和晚上各观察1~2次,每次30~90min,记录观察/拍照时间并分别计算图像距hCG注射或受
5、精的时程。 2结果DIC显微镜观察卵母细胞和各阶段早期胚,见细胞形态呈浮雕状的立体图像,各种结构边界清晰、细节明显,对比度适当,可以准确生动地显示如细胞与细胞核的边界、细胞质内的细胞器颗粒、细胞核内的核仁、染色质颗粒等微细结构。本研究分8个阶段连续观察早期胚形成与发育的全过程,包括:(1)排卵前卵母细胞；(2)排卵后卵母细胞；(3)受精；(4)受精卵；(5)二细胞胚；(6)四细胞胚；(7)八细胞-桑椹胚；(8)囊胚。每个阶段分别观察≥50个目标,选取有代表性的各阶段细胞/胚胎摄影图像并依据时间次序排列，构成图谱。卵母细胞和各阶段胚胎形态的DIC显微图谱见图1。依照从卵母细
6、胞成熟至囊胚扩展的次序,对卵母细胞成熟和早期胚发育全过程的形态特点概要描述如下。小鼠卵巢排卵前卵泡中挑取的未成熟卵母细胞,可见卵母细胞肥大,紧贴透明带,细胞质内充满细小的颗粒状物质(简称胞质颗粒);细胞核(生发泡)大而圆,核膜边缘清晰,核内可见核仁及多个染色质颗粒［图1-(1~3)］;部分卵母细胞的生发泡转移靠近细胞表面,胞质颗粒变粗并呈聚集状态,提示细胞骨架发生重组［图1-(3)］。图1-(4~6)为排卵前的成熟卵母细胞,［图1-(4)］示生发泡破裂,胞质颗粒进一步增粗;部分卵母细胞胞质局部呈山丘状突出［图1-(5)］,并排出形成第一极体,胞质颗粒恢复为细小状态［图1-(
7、6)］。排卵后从输卵管壶腹部挑取的卵母细胞与排卵前的成熟卵母细胞在形态上并无显著差别［图1-(7~8)］,细胞质内紧靠极体或附近区域可见纺锤体［图1-(7~8)］,纺锤体处胞质颗粒极少或缺乏。体外受精时,大量精子附着于透明带上,可见卵母细胞因甲醛固定而缩小［图1-(9)］,个别精子穿透透明带［图1-(10~11)］;可见单个精子头部已经穿过卵母细胞膜,并在卵母细胞表层胞质中形成核膨胀［图1-(10~11)］,该处卵母细胞胞质呈锥体状突出成为“受精锥”［图1-(10~11)］;部分卵母细胞在精子核膨胀时即排出第二极体
