小鼠接种hbv外膜小s蛋白产生的细胞免疫反应

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1、小鼠接种HBV外膜小S蛋白产生的细胞免疫反应【摘要】 目的研究接种基因重组乙肝病毒疫苗RHBs产生的细胞免疫反应。方法四组小鼠，腹腔分别接种0、、、、5μgRHBs；4周后分离脾T淋巴细胞，分别检测CTL及特异性增殖反应。结果CTL特异性释放率分别为：%±%、%±%、%±%、%±%，均高于0组小鼠CTL释放率%±%，差异均有显著性；、、、5μg组小鼠特异性增殖刺激指数SIspecificcellularimmuneresponsewasstudiedinmiceimmunizatedwithrecombinantHBVvaccine.Methods BALB/cmicewereinoc

2、ulatedintraperitoneallywithRHBsatthedosesrangingfrom0～5μg,weeksaftertheboostingimmunization,spleenTlymphocytewererestimulatedinvitrowithspecificpeptidesorRHBsseparately,todetectspecificcytotoxicTlymphocyteresponseandspecifichelperTlymphocyteproliferativeactivity.Results ForCTLresponse,thepercent

3、agesofspecificreleaseofthespleenlymphocyteingroup、、、%±%、%±%、%±%、%±%,whichwereallgreaterthanthatincontrolgroup.TheHTLproliferativeactivityisstronglyassociatedwiththeCTLresponseinthemiceimmunizationwithRHBs.Conclusion OptimalHBVspecificCTLresponseandHTLproliferativeactivitywereinducedforthemiceimm

4、unizedwithRHBs.TherewerestrongassociationbetweenCTLresponseandHTLproliferativeactivity.【Keywords】 generecombinantHBVvaccine；mice；inoculated；CTL；lymphocytespectificproliferation乙肝病毒感染是一种危害人类健康的常见病、多发病，全世界HBV感染者有3亿人。接种HBV疫苗产生的特异性体液免疫反应对预防HBV感染有重要意义，而特异性细胞免疫反应在清除体内已有的HBV、治疗HBV感染过程中起着重要作用。本文给BALB/c小

5、鼠免疫接种不同剂量的HBV外膜小S蛋白疫苗，研究能否产生特异性细胞免疫反应、哪种剂量产生的最强。1 材料与方法 材料 BALB/c小鼠：6～10周龄、SPF级BALB/c。RHBs：基因重组乙肝病毒疫苗，Merck公司生产。RHBsCTL表位特异性多肽，与BALB/c小鼠有相同的H-2d限制），以50mg/ml浓度溶解在70%乙腈/%DMSO储存液中，临用前以培养液稀释。P815细胞：购自中国细胞培养中心。Na251CrO4、3H-甲基胸腺嘧啶：购自中国同位素公司。 方法 小鼠免疫接种 小鼠按以下分组，每组10只。每个小鼠按分组腹腔内各接种不同剂量的RHBs：0组，接种5μg的PBS；

6、组，接种μg的RHBs；组，接种μg的RHBs；5组，接种5μg的RHBs。周后加强免疫接种1次：最后一次接种后4周，分离培养小鼠脾T淋巴细胞。 CTL反应 P815靶细胞用10μg/ml特异性多肽37℃处理4h，并用100μl Na251CrO4、在二氧化碳培养箱37℃标记1h。效应细胞 用含10%FCS的DMEM培养液悬浮小鼠脾T淋巴细胞，加巯基乙醇～5×10-M、小鼠IL-2至5u/ml，二氧化碳培养箱内培养5天后，培养液冲洗2次，按50:1与104标记的靶细胞在96孔细胞培养板上反应4h，每个实验对象检测3次；离心后，取100μl上清用r-记数计检测放射性，用以下公式计算特异性

7、释放率，CTL特异性释放率=/；实验组释放的量是靶细胞与效应细胞作用后靶细胞释放的同位素的量；最大释放的量是靶细胞被5%TritonX-100完全破坏后释放的同位素的量；自然释放的量是靶细胞自身在实验期间释放的同位素的量。 淋巴细胞特异性增殖实验 用含10%FCS的DMEM培养液悬浮小鼠脾T细胞，加巯基乙醇至5×10-M、小鼠IL-2至5u/ml，二氧化碳培养箱内培养5天后，用RHBs体外刺激，10天后小鼠脾T细胞用培养液冲洗2次，再用DMEM