单克隆抗体技术（正本）

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1、单克隆抗体实用技术Ⅰ4一、抗体技术概述4二、单克隆抗体技术的历史4三、单克隆抗体（McAb）和常规免疫血清抗体的特性比较5五、动物免疫13六、免疫失败的可能原因及应采取的措施13七、多克隆抗体技术及其制备141.多克隆抗体的概念147.抗血清质量的评价168.免疫血清的制备17八、骨髓瘤细胞及饲养细胞的制备191.操作过程192.细胞计数20九、脾细胞制备20十、细胞融合211．细胞融合前准备212．细胞融合的步骤22十一、阳性细胞株的筛选、检测231.HAT选择杂交瘤细胞232.抗体的检测23十二、杂交瘤的克隆化241.有限稀释法242.软琼脂克隆化25十三、杂交瘤细胞的保存与复苏26

2、470十四、杂交瘤细胞的大量繁殖（腹水的制备）27十五、单克隆抗体的提纯271.IgG的分离与提纯272.IgA的分离与提纯303.免疫球蛋白：分泌型IgA的分离与提纯31十五、单克隆抗体的鉴定34十六、单克隆抗体的非特异性结合阻断34单克隆抗体技术实用手册Ⅱ35一、杂交瘤技术的诞生35三、杂交瘤细胞筛选39五、杂交瘤细胞的冻存与复苏43六、单克隆抗体的生产46七、单抗的标记48马传贫病毒单克隆抗体的制备（案例）51酶标抗体/抗原的制备Ⅲ52戊二醛二步法制备HRP结合物52简易过碘酸钠法制备HRP结合物53酶标记抗体53HRP标记抗体的方法54戊二醛二步法54简易过碘酸钠法55常用标记免

3、疫酶及其底物56酶标抗体结合物的纯化58酶标记方法59470免荧光素标记抗体60ELISA检测技术Ⅳ63ELISA的原理63ELISA的类型63ELISA的试剂82ELISA的操作要点87ELISA的概念、原理、操作步骤91ELISA方法详细过程及步骤93体外诊断试剂-超级ELISA优化方案95ELISAprotocol：96CellularELISAProtocol96免疫胶体金技术手册Ⅴ99原理99胶体金的制备99制备高质量胶体金的注意事项100胶体金标记蛋白的制备100免疫金试纸膜和试剂盒检测法103免疫金试纸膜和试剂盒检测法104胶体金的稳定性及免疫胶体金的贮存105胶体金的制备

4、105胶体金标记技术在免疫学中的应用106胶体金的性质106动物细胞培养手册Ⅵ108第一章细胞培养的基本原理与技术108470第二章细胞培养液110第四节合成细胞培养基114第三章细胞培养的基本方法第一节培养细胞的细胞生物学118第二节细胞分离技术121第四节细胞计数及活力测定123第四章大规模培养技术127第一节大规模培养技术应用简介127第三节大规模培养技术的操作方式130第五章常见组织细胞的培养方法135第六章肿瘤细胞的培养138无菌操作基本技术Ⅶ152一、准备室的设备152二、实验用品156三、培养基157四、抗生素160五、血清160六、细胞传代培养161七、细胞冷冻保存（一）

5、162九、冷冻细胞活化163十、收到细胞的处理方式163十一、细胞培养中遇到的问题164细胞培养原理Ⅷ176二、组织培养的细胞生物学特点179470单克隆抗体实用技术Ⅰ一、抗体技术概述当前，免疫学技术正沿着基础研究－应用研究－高技术开发研究3条主线在开展，三者互相促进，推动着技术平台的发展；同时它不断向生物学和医学各个学科渗透，推动现代医学的发展。抗体技术在免疫学中占着重要的地位。杂交瘤技术的建立和细胞因子对免疫细胞发育、分化影响的发现，基因工程技术的发展，使实验室的研究直接转向生物高技术产品的开发，如重组细胞因子、单克隆抗体及其相应的试剂盒、基因工程抗体和疫苗等已经或正在投入临床使用，

6、特别是抗体药物以其对人体无毒无副作用、完全天然和高度特异性的疗效，越来越显示其优势，并创造出巨大的社会效益和经济效益。随着人类全基因组的破译，相信抗体技术将会有更广阔应用前景。抗体的类型主要有：1．多克隆抗体主要是将有效抗原注入人体或动物，由人或动物体内的B细胞产生抗体。由此产生的抗体是针对多种抗原决定簇的混合抗体，故称之为多克隆抗体。此技术经过长期实践已经发展的相当成熟，在免疫学诊断中的应用也相当广泛。2、单克隆抗体470杂交瘤抗体技术的基本原理是通过融合两种细胞而同时保持两者的主要特征。这两种细胞分别是经抗原免疫的小鼠脾细胞和小鼠骨髓瘤细胞。脾淋巴细胞的主要特征是它的抗体分泌功能和能

7、够在选择培养基中生长（选择原理见后），小鼠骨髓瘤细胞则可在培养条件下无限分裂、增殖，即所谓“永生”性。在选择培养基的作用下，只有Ｂ细胞与骨髓瘤细胞融合的杂交细胞才具有持续增殖的能力，形成同时具备抗体分泌功能和保持细胞永生性两种特征的细胞克隆。单克隆抗体的理化性状高度均一，生物活性单一，与抗原结合的特异性强，便于人为处理和质量控制，并且来源容易，所以一问世便受到欢迎和重视。在医学领域中，McAb在诊断疾病、判断预后、防治疾病以及疾病机