cycline蛋白在食管鳞状细胞癌组织中的表达及意义

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1、CyclinE蛋白在食管鳞状细胞癌组织中的表达及意义作者：张金添，黄汉兴，吴永廉【摘要】目的观察CyclinE在食管鳞状细胞癌和癌周正常食管组织的表达，从量化角度阐明其在食管鳞状细胞癌组织中表达的病理学意义。方法常规石蜡包埋、HE切片确诊，免疫组化MaxVision法检测CyclinE在食管鳞状细胞癌和癌周正常食管组织的定位和表达，Image-proplus图像分析软件对其表达强度进行定量分析，并用表达的阳性单位(positiveunit，PU)反映其表达强度。结果CyclinE蛋白在食管鳞状细胞癌和癌周正常食管组织中的表

2、达主要定位在细胞核。食管鳞状细胞癌表达的PU值高于癌周正常食管组织(P<0.01)，CyclinE蛋白表达的PU值与食管癌分化程度有关(P<0.01)，低分化鳞状细胞癌表达的PU值高于高分化及中分化鳞状细胞癌。CyclinE蛋白表达的PU值与食管癌患者的性别、年龄、转移和TNM分期未见明显相关性(P>0.05)。结论CyclinE蛋白表达程度与食管鳞状细胞癌及分化程度具有相关性，可能成为判断其指标之一。【关键词】食管癌;CyclinE;免疫组化;定量分析9细胞周期蛋白E(CyclinE)在多种肿瘤中有基因

3、过表达，对肿瘤的发生发展起重要作用，已被证实是一种癌基因[1-2]。本研究拟通过原位定量检测CyclinE蛋白的表达，从量化角度揭示其在食管鳞状细胞癌中的表达特点，阐明其与食管鳞状细胞癌分化程度、转移和分期的关系，探索其在食管鳞状细胞癌中表达的意义。　　1材料和方法　　1.1材料及分组收集福建省莆田市第一医院病理科资料完整的原发性食管鳞状细胞癌手术切除标本(术前未经治疗)54例，其中男37例，女17例，年龄最小43岁，最大80岁，平均61岁;高分化19例，中分化22例，低分化13例;淋巴结转移者26例，无淋巴结转移者28例

4、;TNM分期Ⅰ期6例，Ⅱ期29例，Ⅲ期19例。同时取20例癌周正常食管组织(距肿物5cm以上)做为正常对照。所有标本经10%福尔马林固定、常规石蜡包埋、切片(厚度4μm)、HE染色。　　1.2免疫组织化学染色免疫组化采用MaxVision法。一抗为鼠抗人CyclinE单克隆抗体(即用型)、MaxVision试剂盒及DAB显色试剂盒购自福州迈新生物技术有限公司。主要步骤如下：石蜡切片常规脱蜡至水，1mmol·9L-1、pH6.0柠檬酸高压修复抗原1.5min，3%H2O2室温孵育10min，以清除内源性过氧化物酶活性，滴加一

5、抗室温孵育60min;滴加二抗室温孵育15min，DAB显色5min;不复染(用于图像定量分析)，脱水、透明、封固。每批免疫组化染色均设立阳性和阴性对照，用已知阳性切片作为阳性对照，用PBS缓冲液替代一抗作为阴性对照。　　1.3显微图像定量分析根据阴性和阳性对照的显色情况，在确定无假阳性和假阴性的前提下，以细胞核染成浅黄色、棕黄色或棕褐色为阳性。用Image-proplus图像分析系统，在40倍物镜下，每例样本随机选取10个视野，共测试200个阳性细胞，用交互式测试方法测试每个阳性细胞的灰度值为Gβ，同时在相应的切片中测试

6、背景灰度值Gα，按下式计算每个阳性细胞的阳性单位值,本图像分析系统中的Gmax为256，取每个样本中200个阳性细胞值的均值作为此样本表达的阳性单位值(PositiveUnit,PU)。PU值越大，表达强度越高;反之，表达强度越低。　　PU=

7、Gα-Gβ

8、Gmax×100　　1.4统计学方法用SPSS11.0统计分析软件进行数据处理,采用两样本t检验和方差分析，以P<0.05表示差异有统计学意义。　　2结果　　CyclinE染色主要在细胞核内，染色呈浅黄色、棕黄色、棕褐色为阳性细胞(图1，见封3)。9　　2.1Cyc

9、linE在食管鳞状细胞癌和正常食管黏膜上皮细胞核中的表达食管鳞状细胞癌和正常食管细胞的CyclinE蛋白表达程度不同(8.37±3.86PU,3.29±2.03PU)，二者差异有统计学意义(t=7.317，P<0.01)。　　2.2CyclinE在不同分化程度食管鳞状细胞癌癌细胞核中的表达　　CyclinE蛋白在不同分化程度的食管鳞状细胞癌呈阳性表达，但其表达程度不同，CyclinE蛋白表达的PU值在高分化、中分化和低分化食管鳞状细胞癌间总体比较的差异有统计学意义(P<0.01)，其中高分化食管鳞状细胞癌组及中

10、分化食管鳞状细胞癌组CyclinE蛋白表达的PU值显著低于低分化食管鳞状细胞癌组(P<0.05)，见表1。表1CyclinE在不同分化程度食管鳞状细胞癌细胞中的表达组别nPU值(±s)　　2.3CyclinE蛋白表达与食管癌患者性别、年龄、淋巴结转移、TNM分期的关系　　CyclinE蛋白表达的P