丹参酮ⅱa对兔纤维环细胞能量代谢的保护作用

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1、丹参酮ⅡA对兔纤维环细胞能量代谢的保护作用作者：陈勇　杨述华　张其川　周建国　黄吉军　熊蠡茗【摘要】：［目的］考察丹参酮ⅡA(TSⅡA)对白细胞介素-1β(IL-1β)诱导的兔纤维环细胞能量代谢障碍的保护作用。［方法］藻酸盐串珠立体培养兔纤维环细胞，将细胞分为7组，在培养过程中加入不同浓度的药物：A组为空白对照不加入药物，B组加入4μg／mlTSⅡA，C组加入10ng／mlIL-1β，D～G组在给予10ng／mlIL-1β同时分别加入0．5、1、2和4μg／mlTSⅡA。于培养3d后行Na+-K+-ATP酶活性检测、，琥珀酸脱氢酶活性检测、MTT法细胞增

2、殖情况检测以及细胞凋亡的流式细胞仪检测。［结果］G组Na+-K+-ATP酶活性(3.23±0.28U/mgprot)较C组(1.118±0.15U／mgprot)明显增高(P<0.01)，与A组接近(3.57±0.15U／mgprot)(P>0.05)。G组琥珀酸脱氢酶活性(12.48±0.97U／mgprot)较c组(3.03±0.60U／mgprot)明显增高(P<0.01)，与A组接近(14.24±1.56U／mgprot)(P>0.05)。G组MTT试验吸光度(0.77±0.06)较C组(0.31±0.07)明显增高(P＜

3、0.01)，随着TSⅡA浓度的升高，D～G组吸光度随着TsIIA上升而上升。G组细胞死亡细胞比例和凋亡细胞比例分别为21.08±1.46%和8.99±0.33%，均显著低c组(43.11±2.7，P<0.01和11.71±0.32，P<0.01)。［结论］TSIIA能够减轻IL-1β15对纤维环细胞能量代谢的抑制作用，从而改善纤维环细胞的增殖、死亡及凋亡。【关键词】丹参酮ⅡA　椎间盘　白细胞介素-1β　Na+-K+1-ATP酶　琥珀酸脱氢酶　　1Materialsandmethods　　1.1Materialsandanimals:TSⅡAs

4、tandardpreparationwaspurchasedfromtheNationalInstituteforthecontrolofpharmaceuticalandbiologicalproducts;Fetalbovineserum,DMEM-F12culturemediumandcollagenaseIIfromGibcoCo.(USA);MTTkitfromLingfeiCompanyofScienceandTechnology(Wuhan);pancreatin,DMSO,interleukin-1β(IL-1β),alginatefro

5、mSigmaCo.(USA);theATPasetestkitandthesuccinatedehydrogenase(SDH)testkitfromJianchengBiologicalCompanyofScienceandTechnology(Nanjin);BCAquantitativetestforproteinkit(WuhanBosterBiologicalTechnologyCo.Ltd.),annexinV-FITCkit(JingmeiBiotechCo.Ltd.),OrdinaryJapaneserabbitwasprovidedby

6、animalscenterofTongjimedicalcollegeofHuazhongUniversityofScienceandTechnology.　　1.2Experimentalmethods15　　1.2.1Isolationcultureofrabbitannulusfibrosus(AF)cells:Backskinswasincisedfromposteriorinsterileenvironmentandexposedlumbarinparagraph1to6afterkilledrabbitbyvenousairembolism,

7、andthentakeoutthelumbarwhichhasexposedparagraph.Afterthatstrippingtheintervertebraldisc,pulposusandnon-annulusfibrosustissuewereremoved.Annulusfibrosuswascutintothesizeofthefragmentsofabout1mm3and0.25%pancreatinwasaddedtodigestthesetissuesin37℃for15minutes.Then,PBSwasusedtoremove

8、pancreatinand0.2%collagenaseIIwasaddedfo