人外周血活化淋巴细胞中survivin蛋白表达的分子机制研究

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1、人外周血活化淋巴细胞中Survivin蛋白表达的分子机制研究作者：董燕,梅柱中,钱俊杰,宋宜,田宝磊,刘斌,孙志贤【摘要】　　目的:探讨活化淋巴细胞中Survivin蛋白诱导表达的信号转导通路、分子级联反应和生物效应,揭示Survivin蛋白表达调控的分子机制。方法:用PHA和rhIL2刺激培养人外周血单个核细胞,附加JAK抑制剂—AG490的处理,以Westernblot检测Survivin和相关蛋白的表达;以流式细胞术（FCM）分析细胞周期和细胞分裂增殖。结果:刺激培养的细胞按照时序先后出现的分子和细胞学反应为:St

2、at3和Stat5磷酸化→CyclinD3、CyclinE蛋白水平上调→细胞进入S期及Survivin蛋白起始表达→细胞有丝分裂及Survivin蛋白表达水平增加。AG490对于上述反应均呈现明显的抑制作用,但对周期抑制蛋白P21和抗凋亡蛋白Bcl2的表达水平没有影响。结论:Survivin蛋白的表达依赖JAKStat信号转导通路的早期活化,通过上调CyclinD3和CyclinE周期蛋白水平,启动细胞周期的运行,诱导Survivin蛋白的周期时相依赖性表达,参与细胞有丝分裂与增殖。【关键词】Survivin蛋白活化淋

3、巴细胞信号转导细胞增殖　　[Abstract]AIM:investigatethemolecularmechanismof13regulatingsurvivinexpressionandrelatedsignaltransductionpathway,molecularcascadereactionandbiologicaleffectsinactivatedPBMC.METHODS:TheexpressionofsurvivinandrelatedproteinsweredetectedbyWesternblotinP

4、BMCstimulatedbyPHAandrhIL2withorwithoutJAKinhibitorAG490treatment,andFCMwasperformedtoanalyzecellcycleandcelldivision.RESULTS:OurresultsindicatedthatmolecularandcellularreactionsinPBMCactivatedbyPHAandrhIL2weredependentontimeseries.Atfirst,thephosphorylationofS

5、tat3andStat5wereobserved,then,proteinlevelsofCyclinD3andCyclinEincreased,andthestimulatedPBMCbegantoentertoSphagewithsurvivinproteinexpressionwasinitiated,whichatlastresultedincelldivisionwithdramaticallyincreasingexpressionofsurvivinprotein.AG490couldsignificantl

6、yinhibitallthesereactionsbuthadnoeffectontheexpressionsofthecellcycleinhibitorP21andantiapoptosisproteinBcl2.CONCLUSION:TheexpressionofsurvivininstimulatedPBMCwasdependentontheprimarilyactivatedJAKSTATpathway,whichupregulatedCyclinD3andCyclinEproteinlevels,in

7、itiatedthecellcycleprogression,andinducedcellcycledependentsurvivinexpression,andsosurvivinwasinvolvedincelldivisionandcellproliferation.13　　[Keywords]survivin;activatedlymphocyte;signaltransduction;cellproliferation　　存活素（Survivin）是20世纪90年代末期被发现的凋亡抑制蛋白家族成员,因其具有多样

8、的重要生物学功能和特殊的组织表达谱,迅速引起生物医学研究领域的热切关注[1]。前期的研究工作已证明Survivin蛋白同时兼有抑制细胞凋亡和促进细胞增殖的双重功能,并因其在近乎所有的肿瘤组织中特异性表达,已成为近年肿瘤临床诊断的新的分子标志物及肿瘤治疗研究的热点靶分子[2,3]。2001年Fukuda等