乙酰基转移酶2基因多态性与大肠癌遗传易感性的相关性研究

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1、乙酰基转移酶2基因多态性与大肠癌遗传易感性的相关性研究作者：骆瑞珍，张振亚，于跃明，何陆军，乔芳【摘要】目的:探讨N乙酰基转移酶2(NAT2)基因多态性和大肠癌遗传易感性的关系。方法:采用PCRRFLP方法调查NAT2基因多态性在大肠癌组和对照组的分布，对患者临床资料进行统计分析。结果:基因型WT/M2在大肠癌组明显高于对照组（χ2=10.22，P<0.01）。快速型和慢速型在大肠癌组和对照组的分布差异无显著性（χ2=0.13，P>0.05）。吸烟者在大肠癌组的出现频率显著高于对照

2、组，χ2=5.42，P<0.05。高吸烟指数者中，WT/M2基因型在大肠癌组的分布频率显著高于对照组，χ2=5.45，P<0.05。患者中WT/M2基因型频率在≥60岁组高于<60岁组，差异有显著性（χ2=4.69，P<0.05），在病理类型、性别、淋巴结有无转移、肿瘤浸润广度等方面差异无显著性。结论：NAT2WT/M2基因型可能是大肠癌发生的高危因素，该基因型的个体吸烟剂量大、高龄可能增加大肠癌发病风险。【关键词】大肠癌；N乙酰基转移酶2；基因多态性；限制性片段长度多态

3、性　　N7乙酰基转移酶2（NAT2）直接影响杂环胺类物质在人体内的代谢，推测和大肠癌有关。我们采用聚合酶链反应限制性片段长度多态性（PCRRFLP）方法进行病例对照研究，探讨NAT2基因多态性和大肠癌遗传易感性的关系。　　1材料与方法　　1.1材料随机选取2005年11月至2006年11月河北医科大学第四医院病理确诊的大肠癌患者83例，年龄29岁~74岁；男46例，女37例。对照组83例排除肿瘤、遗传性疾病、结缔组织病等疾病，与大肠癌患者同民族、同性别，职业、年龄、居住史具有可比性，年龄26岁

4、~73岁；男46例，女37例，实验对象均为血缘无关个体，抽取静脉血3ml，EDTA抗凝送检。　　1.2方法　　1.2.1采用PCRRFLP方法调查NAT2基因多态性按照PELFREEZ试剂盒操作说明提取DNA。PCRRFLP方法进行NAT2基因分析：上游引物：5，GGAACAAATTGGACTTGG，下游引物：5，TCTAGCATGAATCACTCTGC。PCR反应体系为40μl（包括基因组DNA50ng~200ng，引物20mM，dNTP1.25mM，MgCl2225mM，1×PCR缓冲液

5、，Taq酶5U）。循环参数设定：95℃预变性5min；95℃1min，57℃1min，72℃1.5min循环35次，72℃延伸5min。扩增之后，分别取157μlPCR产物以KpnI酶（M1allele）、TaqI酶（M2allele）、BamHI酶（M3allele）、MspI/AluI酶（M4allele）进行限制性酶切，酶切产物在琼脂糖凝胶中电泳1h~3h，用凝胶成像分析系统拍照分析。　　1.2.2调查大肠癌组临床资料如吸烟、年龄、性别、淋巴结转移、肿瘤浸润广度、病理分级等。　　1.3统计学

6、处理应用SPSS10.0软件，以χ2检验等进行统计学分析，检验水准α=0.05，以比值比（OR）表示相对危险度。　　2结果　　2.1NAT2基因多态性与大肠癌的相关性　　2.1.1NAT2各种基因型在大肠癌组和对照组的分布各种基因型分布如表1所示，WT/M2在大肠癌组明显高于健康人群，差异具有显著性。　　表1大肠癌组与对照组NAT2基因型分布比较（略）　　2.1.2快、慢速基因型在大肠癌组和对照组的分布如表2所示，快速基因型在两组的分布差异无显著性。7　　表2大肠癌组与对照组NAT2快速基因型分布

7、比较（略）　　注：χ2=0.13，P>0.05。　　2.1.3NAT2各种基因型与大肠癌易感性的相关性以基因型WT/WT的危险度OR为1，则基因型WT/M2　OR为3.21，95%的可信区间为（1.33～7.76），而其余各种基因型的95%可信区间均包括1，见表3。　　表3NAT2各基因型与大肠癌的相关性（略）　　注：χ2=1,2,3,4　　2.2大肠癌患者临床资料分析　　2.2.1NAT2基因型和吸烟、大肠癌易感性的关系吸烟者在大肠癌组的出现频率为59.04%（49/83），显著高于健康组

8、40.96%（34/83），χ2=5.42，P<0.05。吸烟状况通过吸烟指数(SI)评价。SI=每天吸烟支数×吸烟年数。SI≤400为低吸烟指数组，SI>400为高吸烟指数组。高吸烟指数者中，WT/M2基因型在大肠癌组的分布频率显著高于对照组。低吸烟指数者中，WT/M2基因型在两组的分布无明显差异，见表4。7　　表4WT/M2基因型在大肠癌组和对照组不同吸烟指数人群的分布（略）　　2.2.2大肠癌患者中WT/M2基因型与临床病理特征的关系见表5。　　表5大肠癌患者中W