丹参药材超高效液相色谱指纹图谱研究

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1、丹参药材超高效液相色谱指纹图谱研究作者：刘梅，夏鑫华，侴桂新，王峥涛【摘要】【目的】建立丹参药材中水溶性成分丹酚酸类和脂溶性成分丹参酮类的超高效液相(UPLC)指纹图谱方法，为丹参的质量控制提供快速、科学的方法。【方法】以AcquityC18BEH(21mm×100mm，17μm)色谱柱，乙腈(A)体积分数04%甲酸溶液(B)梯度洗脱，90%~50%A，0~10min;75%A，15min。检测波长280nm，柱温30℃，流速05mL/min。【结果】在15min内得到丹参药材水溶性和脂溶性成分的指纹图谱，峰容量85。并采用液质连用技术(HPLCDADESI/MSn)鉴定

2、了其中的20个特征峰。【结论】UPLC指纹图谱方法具有灵敏、快速、简便、准确等特点，适合于丹参药材及其制剂的指纹图谱研究和质量控制。【关键词】丹参/化学;丹酚酸类/分析;丹参酮类/分析;指纹图谱;色谱法，超高效液相;液质连用11丹参是我国应用最广泛的中药品种之一，临床上有很好的疗效，以丹参作为原料药或君药的单一或复方制剂种类繁多。丹参药材指纹图谱的研究主要集中在分别研究丹参的水溶性成分和脂溶性成分指纹图谱[1-6]，这些方法基本均是将水溶性与脂溶性成分分开，分别建立指纹图谱。作为一种药材中的两大类成分，若能将两者结合起来，在同一张谱图上得到表征，直观地比较其化学成分的差异，将是一项十分

3、有益的工作。目前也有一些报道采用高效液相色谱—二极管阵列检测器(HPLCDAD)或高效液相色谱—质谱检测器(HPLCMS)连用的方法建立同时表征丹参药材中水溶性与脂溶性成分的指纹图谱，但是采用HPLC技术，尚难以兼顾和保证两类成分都具有良好的分离度，而且耗时较长。因此，本课题组尝试采用快速色谱技术——超高效液相色谱(UPLC)建立丹参的指纹图谱，现报道如下。　　1材料与试剂　　11实验材料共收集了12个省、市(区)的丹参商品药材13份(表1)。药材经上海中医药大学中药研究所吴立宏博士鉴定为唇形科植物SalviamiltiorrhizaBge.的干燥根茎。　　12仪器与试药Wat

4、ersACQUITYUPLCTM超高效液相色谱仪，包括AcquityBinarySolventModule二元可选四溶剂高压梯度泵，含在线真空脱气机、AcquitySamplerModule低扩散自动进样器、AcquityTUVDetector高速紫外检测器及EmpowerII色谱管理软件(Milford，Boston，MA，USA)。MilliQsystem超纯水制备器(Millipore，Bedford，MA，USA)，KQ250DB数控超声波清洗仪(昆山市超声仪器有限公司)，BP211D型电子天平(Satorius11Co.Ltd.，德国)。甲醇、乙醇、甲酸均为分析纯(上海国

5、药集团试剂有限公司)，乙腈为色谱纯(Merck公司)，超纯水为MilliQ处理水(MilliporeCo.)。对照品丹参素钠、原儿茶醛、咖啡酸、迷迭香酸、紫草酸、丹酚酸B、丹酚酸A、二氢丹参酮I、丹参酮I、隐丹参酮和丹参酮IIA均由上海中药标准化研究中心提供。　　2方法与结果　　21色谱条件与质谱参数　　211超高效液相色谱条件AcquityC18BEH(21mm×100mm，17μm)色谱柱，乙腈(A)-体积分数04%甲酸溶液(B)梯度洗脱，90%~50%A，0～10min;75%A，15min。检测波长280nm，柱温30℃，流速05mL/min，进样量2μL，运行

6、时间15min。表1不同产地丹参药材　　212超高效液相色谱—质谱连用(LCMS)条件流动相为乙腈(A)—体积分数04%甲酸溶液(B)，洗脱程序与上述条件相同。柱后分流，分流比为1∶50，进样量10μL，柱温30℃，电喷雾离子源(ESI)，源电压-32kV，负离子模式，雾化气(GAS1)：233Pa，帘气(CUR)：16psi，去簇电势(DP)：-20V，聚焦电势(FP)：-80V，去簇电势2(DP2)：-20V。质谱扫描质量范围质荷比(m/z)100～800。11　　22样品溶液和标准品溶液的制备　　221样品溶液的制备取丹参粉末05g(过40目筛)，精密称定，精

7、密加入体积分数10%甲醇20mL，浸泡30min后，超声提取30min，放冷，3000r/min离心10min，取上清液5mL置25mL量瓶中。残渣加甲醇20mL，浸泡30min后，超声提取60min，放冷，3000r/min离心10min，取上清液将上述25mL量瓶补足至刻度，即得。　　222标准品溶液的制备取对照品丹参素钠、原儿茶醛、咖啡酸、迷迭香酸、紫草酸、丹酚酸B、丹酚酸A、二氢丹参酮I、丹参酮I、隐丹参酮、丹参酮IIA适量，精密称