外周血mscs的分离培养及对gcsf的动员反应

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1、外周血MSCs的分离培养及对GCSF的动员反应作者：邓均，邹仲敏，张春雷，王军平，艾国平，粟永萍【摘要】目的建立多种种属外周血间充质干细胞（MSCs）的分离培养方法，探讨其对粒细胞集落刺激因子（GCSF）的动员反应。方法用percoll（1.131g/mL）分离多种种属外周血单个核细胞，进行贴壁培养MSCs。以GCSF作为动员剂，培养骨髓和外周血来源的MSCs，计数动员前后的成纤维细胞集落形成单位（CFUF）。结果对多种种属进行外周血MSCs分离培养，成功率不同。在本实验条件下，可以稳定的直接分离培养出大鼠外周

2、血的MSCs。GCSF动员后，骨髓来源MSCs的CFUF数量显著高于对照组（P＜0.01）；外周血来源MSCs的CFUF数量也显著高于对照组（P＜0.01），接近4倍。结论不同种属外周血MSCs分离培养难易不同，其直接原因是生理条件下外周血中存在的MSCs量少导致的。GCSF可以有效地动员大鼠骨髓和外周血MSCs。【关键词】间充质干细胞；动员；粒细胞集落刺激因子；细胞培养Abstract:ObjectiveToestablishtheisolatingculturalmethodofMSCsfromsomege

3、nusperipheralblood(PB),andexplore9themobilizationresponseofMSCsbyGCSF.MethodsMSCsfromsomegenusPBwereisolatedbypercoll(1.131g/mL)andcarriedoutadherentculture.MSCsderivedbonemarrowandPBwereculturedanditsCFUFwerecountedaftermobilizationbyGCSF.ResultsPBMSCswerei

4、solatedandcultureedsuccessfullyorunsuccessfullyfromdifferentgenus.Underourexperimentcondition,rat’sPBMSCscouldbeenisolatedandculturedsteadily.AsignificantlyhighernumberofCFUFofBMderivedMSCsandPBderivedMSCsthanthatofcontrolgroupaftermobilizationbyGCSF（P＜0.01）

5、，almost4foldincrease.ConclusionPBMSCswereisolatedandculturedsuccessfullyorunsuccessfullyfromdifferentgenus,itconcernedwithasmallnumberofcirculatingMSCsinBP.WeconfirmedthatGCSFmobilizedBMderivedMSCs,especiallyPBderivedMSCsbyCFUFassay.Keywords:mesenchymalstem

6、cell;mobilization;GCSF;cellculture正常生理情况下，间充质干细胞（mesenchymalstem9cells，MSCs）大量存在于骨髓，循环血液中仅有少量。已有研究证实可从胎儿和新生儿血液中分离培养出循环MSCs［1］。但从成熟个体外周血中分离MSCs，因受实验人员、环境、方法等影响，有成功［2］也有失败的［3］。对不同种属动物(或人)的外周血MSCs进行分离培养，其结果也不一样。粒细胞集落刺激因子(granulocytecolonystimulatingfactor，GCSF)作

7、为体内重要的调节因子，自GCSF分子克隆和基因合成成功以来，在临床上已广泛应用。而GCSF大量应用于白血病的临床治疗，主要得益于其对造血干细胞的有效动员。那么除了动员造血干细胞外，GCSF能否动员骨髓细胞中的MSCs或其他干细胞，还存在着很大争议［4］。因此，本研究对不同种属的外周血MSCs进行分离培养，在本实验室条件下建立成熟的分离培养外周血MSCs的方法，并探讨GCSF能否有效动员外周血MSCs。1材料与方法1.1实验动物及主要试剂2月龄的健康清洁SD大鼠，体重100～150g，雌雄不拘。健康C57BL/6

8、小鼠，雌雄不拘，SPF级，6周龄，体重20～25g。健康日本大耳白兔。动物均由本校实验动物中心提供。MEM/F12培养基、胎牛血清（Gibco公司，美国），GCSF（齐鲁制药有限公司）。1.2外周血MSCs的直接分离和培养91.2.1实验标本为了探讨在本实验条件下，能否直接从外周血中分离培养出MSCs，拟对小鼠、大鼠、兔、人的外