川芎嗪抑制大鼠血管平滑肌细胞增殖的作用

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1、川芎嗪抑制大鼠血管平滑肌细胞增殖的作用【摘要】目的观察川芎嗪注射液对血小板源性生长因子(PDGF)诱导的大鼠血管平滑肌细胞(VSMC)异常增殖过程中黏附分子信号传递的影响，以明确川芎嗪活血化瘀作用的新靶点。方法采用贴块法培养VSMC，建立PDGF诱导的VSMC增殖模型，用细胞计数法观察不同浓度川芎嗪对VSMC增殖的抑制作用。用Western印迹方法分别检测各组细胞间黏附分子(ICAM1)及黏附分子信号传递蛋白——整合素耦联激酶(ILK)的表达变化及川芎嗪影响。结果与PDGF刺激组相比，川芎嗪呈剂量依赖性地抑制PDGF诱导的

2、细胞增生，并显著降低ICAM1〔仅相当于刺激组的44%，(P<0.05)〕及ILK〔仅相当于刺激组的62%，(P<0.05)〕的表达。结论川芎嗪通过抑制黏附信号传递及黏附分子的表达而发挥抗VSMC增生的作用。【关键词】川芎嗪注射液;黏附分子;信号转导;血管平滑肌细胞　　【Abstract】ObjectiveToinvestigatetheTetramethylpyrazine(TMP)mediatingantiproliferationeffect，anddefineitsmolecularmechanis

3、minculturedrataorticvascularsmoothmusclecells(VSMC).MethodsCulturedcellsproliferatingmodelofratsVSMCwereestablishedbyplateletderivedgrowthfactor(PDGF).Culturedcellswererandomlydividedintothreegroups:control,PDGF(20ng/ml)and9TMPtreatment(20,40,80μmol/L)groups.Thenu

4、mberofVSMCwereaccountedundermicroscope.Theexpressionofintercellularadhesionmolecular1(ICAM1)andintegrinlinkedkinase(ILK)wereanalyzedbyWesternblottingrespectively.ResultsTheproliferationofratVSMCinducedbyPDGFcouldbeinhibitedbyTMPsignificantlyinadosedependentmann

5、er.AremarkabledecreaseofICAM1andILKexpressionweredemonstratedintheTMPgroupcomparedwiththePDGFgroup.ConclusionsTheantiproliferationeffectofTMPassociateswithsuppressionofadhesivemolecules.　　【Keywords】TMP;Adhesivemolecules;Signaltransduction;Vascularsmoothmusclecell

6、s(VSMC);Rat9　　川芎嗪是从具有活血化瘀作用的中药川芎中分离得到的一种生物碱，化学组分为四甲基吡嗪，目前已在临床上广泛用于心脑血管疾病的治疗。我们前期研究证明，川芎嗪通过作用于血管平滑肌细胞(VSMC)而发挥活血化瘀的作用〔1〕，但缺乏在分子水平上阐明其机制的研究。细胞间黏附分子(ICAM)是一类介导细胞与细胞间或细胞与细胞外基质间相互作用的膜表面糖蛋白，在单核细胞及血小板的黏附聚集过程中发挥着重要的作用，与细胞增殖密切相关〔2〕。本研究用血小板源性生长因子(PDGF)刺激体外培养的大鼠VSMC复制细胞异常增殖模型

7、，从抑制黏附分子信号传递角度探讨川芎嗪抗VSMC增殖的机制，为从分子水平上阐明其活血化瘀作用机制提供实验依据，明确其作用靶点。　　1材料与方法　　1.1材料健康雄性5周龄SD大鼠，体重(100±10)g，由河北省实验动物中心提供。川芎嗪注射液(40mg/2ml)由北京第四制药厂提供。DMEM培养基、胎牛血清FBS由Gibco公司提供。PDGF、小鼠抗ICAM1单克隆抗体、小鼠抗整合素耦联激酶(ILK)单克隆抗体、兔抗GAPDH单克隆抗体、HRP标记的羊抗小鼠IgG二抗、发光试剂等均购自美国SantaCruz公司。其他化学试

8、剂均为进口或国产分析纯。　　1.2VSMC的培养5周龄雄性SD大鼠用25%乌拉坦按照0.4ml/100g体重进行腹腔注射麻醉，于无菌条件下取大鼠的胸腹主动脉。用0.01mol/LPBS洗净管腔内血液并剥脱血管外膜后，按贴块法分离培养VSMC。待细胞爬满培养瓶底后，用0.25%胰蛋白酶消化传