RAS信号途径参与干扰素-α抑制大鼠血管平滑肌细胞增殖.pdf

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1、2014年7月基础医学与临床July2014第34卷第7期Basic&ClinicalMedicineVo1．34No．7文章编号：1001—6325(2014)07—0882．04研究论文RAS信号途径参与干扰素一抑制大鼠血管平滑肌细胞增殖龙向淑，吴强，宋方，黄晶，张林军(贵州省人民医院心血管内科，贵州贵阳550002)摘要：目的探讨RAS信号途径在干扰素一(IFN．d)抑制大鼠血管平滑肌细胞(VSMCs)增殖中的作用。方法应用转染IF1204siRNA和／或IFN-瞬时干预体外培养的大鼠VSMCs，以非特异性siRNA转染组为对照组，用MIrr法测定细胞活力，

2、流式细胞仪分析细胞周期，RT—PCR法和Westernblot分别检测P2mRNA、P2o4和Ras蛋白的表达及RAF与ERK的磷酸化水平。结果与对照组比较，IFN一0I组P2mRNA和蛋白表达上调(P<0．01)，细胞活力和细胞周期G．／S转换下调(P<0．01)，伴RAS蛋白表达减少(P<0．01)，RAF及ERK磷酸化水平下降(P<0．01)；转染IF1204siRNA后再加IFN一0【干预，P2o4mRNA及蛋白表达下调(P<0．01)，而G。／G．期细胞增多，s期细胞减少(P<0．01)，且RAS蛋白表达和RAF及ERK磷酸化水平亦下调(P<0．01)。

3、结论RAS信号途径参与IFN一0【抑制大鼠VSMCs增殖。关键词：干扰素；血管平滑肌细胞；增殖；干扰素诱导蛋白；P204；RAS信号途径中图分类号：R363文献标志码：ARASsignalpathwayparticipatesininterferon—OLmediatedinhibitionofproliferationofvascularsmoothmusclecellsinratsLONGXiang—shu，WUQiang，SONGFang，HUANGJing，ZHANGLin—jun(Dept．ofCardiology，GuizhouProvincePeop

4、le’sHospital，Guiyang550002，China)Abstract：ObjectiveTostudytheactionofRASsignalingpathwayininterferonalpha(IFN-)mediatedtoinhi—bitionproliferationofvascularsmoothmusclecells(VSMCs)inrats．MethodsCulturedVSMCsweretreatedwithtransfeetionIFI204siRNAand／orIFN一0【．NonspecificsiRNAtransfection

5、groupwasascontrolgroup．Thecellvi—talitywasdetectedbyMTFmethod，andthecellcyclewasanalyzedbyflowcytometry．TheexpressionofP204mR—NAwasdeterminedbysemiquantitativeRT—PCR．P2o4．RASproteinandthephosphorylationlevelsofRAFandERKwasanalyzedbyWesternblot．ResultsComparedwithcontrolgroup．theexpres

6、sionofP204mRNAandproteinup-regulated(P<0．01)，thecellvitalityandthecellcycleofG1／Stransitiondown—regulated(P<0．01)．Intheprocessoftheabove，theexpressionofRASproteindecreased(P<0．01)andthephosphorylationlevelsofRAFandERKdroped(P<0．01)；WheninterventedwithIFN一aftertrans~ctionIFI204siRNA，do

7、wn．regulatedtheexpressionofP2o4mRNAandproteinweredown—regulated(P<0．01)，andcellsofG0／GlstageincreasedandSstagedecreased(P<0．01)，buttheexpressionofRASproteinandthephosphorylationlevelsofRAFandERKdidnotincreasecorrespondingly(P<0．01)．ConclusionsRASsignalpathwayparticipatesininterferon—o

8、【medi