浅谈红曲米中七株红曲霉纯培养的分离鉴定

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1、浅谈红曲米中七株红曲霉纯培养的分离鉴定摘要：从广西武宣地区的红曲米中分纯得到7株红曲霉纯培养。初步鉴定分属3类：M-1、M-2、M-6属于紫色红曲霉类，M-4、M-5属于红色红曲霉类，M-3、M-7属于丛毛状红曲霉类。发现M-1菌株具有较为突出的红曲色素产生能力，通过形态观察和耐酒精、耐NaCl实验，对M-1菌株进行了种的鉴定。关键词：红曲米；红曲霉；分纯；鉴定 中图分类号：TS201.3                       文献标识码：A自1884年VanTieghen首次分离出红曲霉，至今已有百年的历史。近几

2、年红曲霉的许多功效相继被证实后，红曲菌的相关专利陆续出现。自1975年至1997年为止各国关于红曲霉的专利将近200篇[1]。目前红曲色素应用是红曲研究的主要方向，近20年有近40%的专利都在此领域。1979年红曲霉被发现可产生胆固醇合成抑制剂，红曲霉降血糖、血压及胆固醇功效即成为众人关注的焦点[2]。另外作为食品添加剂也是红曲应用的主要方向，有关添加红曲成为功能性食品的专利有31篇，且多在日本申请。还有用于生产各种酶的专利15篇，以及在化妆品、处理废水、饲料上的应用[3]。对红曲霉的研究已从红曲色素扩展到有关降血压、血

3、糖及胆固醇，红曲霉抗菌作用等多个方面。本论文报道了对广西所产红曲米中红曲霉的分离纯化工作。对广西武宣一带的红曲米中的红曲霉进行分纯，得到了7个纯培养，进行了属的鉴定。发现其中一株有较为突出的抗菌能力（另文发表）；还有一株有较为突出的产红曲色素能力。研究成果扩大了红曲霉的菌种库，为发掘红曲霉生物资源做了有益工作。1 实验材料1.1 红曲米：取自广西武宣地区，是居民制作红糟酸所用的发酵剂。1.2 培养基：富集活化液：120Bx米曲汁900mL，乳酸7mL，无水乙醇100mL，于121℃灭菌20min，使用时以无菌操作加入30

4、ppm链霉素。分纯培养基:120Bx米曲汁900mL，6％NaCl，2％琼脂，121℃灭菌30min。2 研究方法2.1 红曲霉的分纯与鉴定：取红曲米25粒放入100mL富集活化液中，30℃培养５天。采用米曲琼脂汁培养基，对数稀释倾注法分纯。以无菌操作将生长迅速、健壮的菌落，挑取放到富集活化液中继续富集活化，待培养5天后重复上述分纯操作，经过多次操作就可以分离得到红曲霉纯培养。   通过菌落形态、菌丝体形态观察，耐酒精、耐NaCl实验，进行红曲霉纯培养的鉴定。2.2 红曲霉产红曲色素的研究：用米曲汁培养基，遮光，32℃，

5、160r/min培养六天。用分光光度法测定总色价。3 实验结果3.1 红曲霉的富集活化活化培养的第二天，红曲米开始有附着的白色菌丝；第三天红曲米上浮，米身附着大量菌丝；第四天红曲米全部上浮，菌丝开始粘连；五天以后出现白色菌膜；七八天后白色菌膜转变为红色。根据菌体质量测定，红曲霉生长对数期大约处于第五、第六天，最适合用作接种材料。3.2 红曲霉的分离鉴定：3.2.1 菌落形态特征。红曲霉培养初期都为白色小菌落，经过培养后，菌落开始老熟，表面的颜色变化比较丰富，有的菌落颜色开始改变，逐渐变成橙色、浅蓝色、灰色、铅灰色和灰白色

6、等；菌落的主要形状为皮膜状和绒毯状，大多菌落有放射状的沟纹，边沿一般比较整齐。得到7个纯培养，菌落特征见表1。表1　7株红曲霉纯培养的菌落形态菌株  菌落大小  正面形态     皱折     颜色   侧面观    背面颜色    编号   (mm)                                 M-1    38      圆形绒垫状   辐射状    红色     凸起     深红色M-2    20      圆形皮膜状   有皱折    白色    不凸起     红色      M-3  

7、  38      圆形绒垫状   辐射状    橙色     凸起      橙色M-4    40      圆形皮膜状   辐射状    白绿灰①　　不明显     橙色M-5    29      圆形皮膜状   不明显    白铅绿② 不凸起     橙色M-6    20      圆形皮膜状   不明显    白绿③   不凸起     橙色M-7    42      圆形绒垫状   不明显    白色    不凸起     橙色注:①菌落从里至外为三个色环，颜色依次为灰色、绿色和白色；②菌落从里至外为两

8、个色环，颜色依次为灰色和白色；③菌落从里至外为两个色环，颜色依次为绿色和白色。 3.2.2 个体形态特征。30℃培养3天的红曲霉纯培养，用手术刀切取大小约1×1ｍｍ的菌苔，制成水浸片，镜检观察个体形态，7个菌株均观察到细胞横隔，有足细胞，梨形的分生孢子，有的还观察到闭囊壳结构．如图1。      注：气生菌丝和足细胞