细菌营养缺陷型菌株的诱变和筛选鉴定论文

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1、细菌营养缺陷型菌株的诱变和筛选鉴定XXX(生命科学学院,淄博255000)摘要:实验采用物理诱变非电离辐射紫外线（15W）为诱变剂，来对大肠杆菌诱发突变，并用抗青霉素法淘汰野生型（富集营养缺陷型），采用点植对照法检出营养缺陷型，得到一株营养缺陷性菌。最后经生长谱法鉴定营养缺陷型菌株为丝氨酸（ser）缺陷型。关键词：大肠杆菌诱变营养缺陷性紫外线诱变MutagenesisandscreeningidentificationofbacteriaauxotrophicstrainsXXX(CollegeofLifeScience,Zibo255000)Summary:Thisexperiment

2、,theUV(15W)asmutagenicagent,totheE.coliinducedmutation,andoutofthewild-type(withpenicillinmethodconcentratedauxotrophic)tocontrolmethoddetectiondotexplantsdefecttype,abacteria110#.FinalgrowthSPECTROMETRYidentificationauxotrophicstrainsSer(tryptophan)auxotrophic.Keywords:E.coliUVinducedauxotroph实验

3、目的：了解营养缺陷型突变株选育的原理。学习并掌握细菌氨基酸营养缺陷型的诱变、筛选与鉴定方法。实验原理：营养缺陷型是指野生型菌株由于某些物理因素或化学因素处理，使编码合成代谢途径中某些酶的基因突变，丧失了合成某些代谢产物(如氨基酸、维生素)的能力，必须在基本培养基中补充该种营养成分，才能正常生长的一类突变株。这类菌株可以通过降低或消除末端产物浓度，在代谢控制中解除反馈抑制或阻遏，而使代谢途径中间产物或分支合成途径中末端产物积累。在氨基酸、核苷酸生产中已广泛使用营养缺陷型菌株；也可用于遗传学分析、微生物代谢途径的研究及细胞和分子水平基因重组研究中作为供体和受体细胞的遗传标记。营养缺陷型筛选一

4、般分四个环节，即诱变剂处理、营养缺陷型浓缩、检出和鉴定。诱变处理突变频率较低，只有通过淘汰野生型，才能浓缩营养缺陷型而选出少数突变抹。浓缩营养缺陷型有青霉素法、菌丝过滤法、差别杀菌法和饥饿法四种。检出营养缺陷型也有逐个测定法、影印培养法、夹层培养法和限量补给法四种。鉴定营养缺陷型一般采用生长谱法。本实验选用紫外线为诱变剂，来诱发突变，并用青霉素法淘汰野生型，逐个测定法检出缺陷型，最后经生长谱法鉴定细菌的营养缺陷型。一、材料与方法1.1材料1.1.1菌种：大肠杆菌（E.coli）1.1.2培养基：LB培养液：酵母膏，0.5g；蛋白胨，1g；NaCl，0.5g；水，100ml，pH7.212

5、1℃灭菌15min2×LB培养液：酵母膏，0.5g；蛋白胨，1g；NaCl，0.5g；水，50ml，pH7.2121℃灭菌15min基本培养基：葡萄糖0.5g，(NH4)2SO40.1g，柠檬酸钠0.1g，MgSO4·7H2O0.02g，K2HPO40.4g，KH2PO40.6g，重蒸水100mL，pH7.2，110℃灭菌20min。配固体培养基时需加2%洗涤处理过的琼脂。无N基本液体培养基：K2HPO4,0.7g；KH2PO4,0.3g;柠檬酸钠3H2O,0.5g；MgSO47H2O,0.01g;葡萄糖2g；水100ml，pH7.0110℃灭菌20min2N基本培养基：K2HPO4,0

6、.7g；KH2PO4,0.3g;柠檬酸钠3H2O,0.5g；MgSO47H2O,0.01g;(NH4)2SO4,0.2g;葡萄糖2g；水100ml，pH7.0110℃灭菌20min完全培养基同LB培养基，配置固体培养基，需加2%的琼脂。1.1.3混合氨基酸和混合维生素[2]1.2方法1.2.1诱变处理1thday，接种：取一环E.coli于5mlLB液体三角瓶中，37℃培养过夜。2thday，诱变：早上添加5mlLB液，继续培养5小时，取5ml菌液与离心管中，离心（3500rpm）10分钟（注意配平，相对两管相差不超过0.01g），弃上清，加生理盐水5ml，打匀沉淀，吸菌液3ml于75m

7、m培养皿内，将培养皿置于15W紫外灯下30cm处（处理前紫外灯预热30min），将培养皿连同盖一起置于15W紫外灯下灭菌1min，然后打开皿盖摇床照射（1min、2min、3min、4min），照射后先盖上皿盖再关灯。吸3ml2倍LB液加入处理过的菌液平皿内，混匀，用黑布（纸）包好，置37℃避光培养12h以上。1.2.2营养缺陷型浓缩（淘汰野生型）3thday，延迟处理：吸菌液5ml于离心管中，3500rpm离心10min，弃上清。