唾液淀粉酶最适ph值测定论文

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1、唾液淀粉酶最适ph值的实验测定论文拉丁广西医科大学基础医学2011级摘要：了解唾液淀粉酶的最适ph，把酶学知识应用于临床诊断与应用治疗。本实验目的掌握精测唾液淀粉酶最适pH值的方法，熟悉缓冲溶液的配置，722分光光度计的使用。通过测定碘液与淀粉的不同程度水解的产物反应后的吸光度，测出唾液淀粉酶的最适PH值，约为6.2。关键词：淀粉酶ph吸光度前言：酶无论在生活中还是在医学领域都有很大的研究意义，研究酶可以很好应用酶的各种特性，在各种领域广泛应用。影响酶反应活力的因素很多，影响胞外酶的因素主要包括PH值、温度和金属离子、抑制剂及其他小分子，以及酶浓度等因素。PH值对酶反应活力的影响：1

2、、酸或碱可以使酶的空间结构破坏，引起酶的活力丧失，这种丧失活力可以是可逆的或者是不可逆的，对可逆的来说，改变PH值后可使活力恢复。2、酸或碱影响酶的活性部位催化基团的离解状态，使得底物不能分解成产物。3、酸或碱影响酶的活性部位结合基团的离解状态，使得底物不能和它结合。4、酸或碱影响底物的离解状态，或使底物不能和酶结合。由于上述种种原因，各种酶的作用都有一个最适合的PH值范围。实验原理：ph的改变对酶的催化影响很大，酶催化活性最高时，反应体系的PH值称为最适PH值。本实验用唾液淀粉酶为材料来观察酶活性受ph影响的情况。淀粉被分解越多，剩余底物越少，A值最小，过酸或过碱会抑制酶的活性，使

3、底物分解减少，A值增大。碘液与淀粉的不同程度水解的产物反应呈不同颜色，即：淀粉（蓝色）、紫色糊精（紫色）、红色糊精（红色）、麦芽糖及葡萄糖（黄色）。[1]利用朗伯—比尔定律，用分光光度计测量出各溶液在660nm处地吸光度A，从而间接测出唾液淀粉酶的最适PH值。A在ph值6.0~8.0内范围变化，并且随着ph的增大而先减少后增大，ph=6.2左右，吸光值最低，所以唾液淀粉酶最适ph值约为6.2。实验仪器与试剂：试管、试管架、洗耳球、小烧杯、坐标纸、37℃恒温水箱、v-1110D可见分光光度计、吸量管（1ml5ml10ml）试剂药品：0.4g/L缓冲淀粉溶液、碘液、0.2mol/L磷酸二

4、氢钠溶液、0.2mol/L磷酸氢二钠溶液、蒸馏水（1）配置缓冲液[2]：配置各个PH的缓冲液10ml，选择ph值从6.0到8.0，间隔0.2.不同ph值的测定用量（10ml）————————————————————————————————————————————试剂6.06.26.46.66.87.07.27.47.67.88.0————————————————————————————————————————————磷酸氢二钠0.6150.9251.3251.8752.453.053.64.054.354.5754.735磷酸二氢钠4.3854.0753.6753.1252.551.

5、951.40.950.650.4250.265————————————————————————————————————————————定容到10ml（2）唾液的获取：蒸馏水漱口1~2次，,然后含一大口水约1min，期间做咀嚼运动，然后收集至杯子中。（3）淀粉用量的确定：管号123空白7.0PH缓冲液0.90.90.90.92.5g/L淀粉0.40.50.6-唾液（稀释10倍）0.10.10.10.1混匀，37 ℃水浴7.5min，然后向每管加2滴碘液H2O5.65.55.46.0混匀，观察现象，并选择适中一支，记录其中用量结果：0.4ml2.5g/L淀粉为最适量（颜色最浅）（4)酶液

6、稀释倍数的确定：稀释倍数51015202530酶液（ml）10.50.40.250.20.2H2O(ml)44.54.64.754.85.8另取试管各取配好的稀释液0.1ml：管号1234567稀释倍数51015202530空白7.0PH缓冲液0.90.90.90.90.90.90.92.5g/L淀粉由第3步操作确定唾液0.10.10.10.10.10.10.1混匀，37 ℃水浴7.5min，然后向每管加2滴碘液H2O(ml)6666666混匀，观察现象，并选择适中一支，记录稀释倍数结果：观察到酶稀释十倍2号管颜色最浅，所以酶稀释十倍最适合（5)最适pH确定：PH试剂6.06.26.

7、46.66.87.07.27.47.67.88.0PH缓冲液0.90.90.90.90.90.90.90.90.90.90.92.5g/L淀粉由第3步操作确定某倍数唾液0.10.10.10.10.10.10.10.10.10.10.1（由第4步操作确定）混匀，37 ℃水浴7.5min，然后向每管加2滴碘液H2O(ml)66666666666混匀，用蒸馏水调零，测定A660nmA660nm0.3800.2690.3520.3730.3690.3460.471