雌二醇对大鼠垂体前叶白细胞介素_论文

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1、雌二醇对大鼠垂体前叶白细胞介素作者：钟延清　朱运龙　王高峰　张万会　陈健康　曹云新【关键词】白细胞介素8关键词:白细胞介素8;大鼠;垂体，前叶;雌二醇摘要:目的研究孕鼠和大鼠性周期不同阶段以及大鼠体内雌激素水平变化对垂体前叶（Anteriorpituitary，AP）内IL-8样免疫阳性物质表达的影响.方法免疫组织化学ABC法.结果IL-8样免疫阳性物质在雌性大鼠性周期不同阶段有所差异，在动情期，垂体边缘IL-8样强染阳性细胞数明显增多;妊娠20d大鼠的垂体前叶中央部分阳性细胞染色强度明显增加.双侧卵巢摘除大鼠和正常雌性大鼠皮下注射25μg・（

2、kg・d）-1苯甲酸雌二醇2wk后，也能观察到相同结果.结论大鼠体内雌激素水平能影响垂体前叶内IL-8样免疫阳性物质的含量.Abstract:AIMToinvestigatechangesinIL-8likeim-munoreactivesubstanceintheanteriorpituitary（AP）ofpregnantratsandruscyclesandnumer-ousstectionof25μg・（kg・d）-likeimmunore-activesubstanceinAP.11/110引言越来越多的实验证据表明，神经、免疫和内分

3、泌三大系统可共享信息分子及其受体［1，2］.白细胞介素-8（Interleukin-8，IL-8）是一种主要由单核-巨噬细胞合成和分泌的免疫趋化因子，在炎症反应中起重要作用.我室以往的研究［3］发现，大鼠垂体前叶存在IL-8样免疫阳性物质，且有特殊的分布格局，即强染阳性物质主要分布于前叶的浅层部分，中间部分则为弱染阳性细胞.有研究显示，机体雌激素水平变化可显著性影响某些细胞因子的表达，如雌激素能抑制大鼠子宫蜕膜细胞IL-6及IL-6R的表达［4］;雌激素可抑制大鼠垂体TGF-β免疫阳性细胞的数量［5］.为研究雌激素对大鼠垂体前叶IL-8样免疫阳

4、性物质表达可能的调控作用，本实验应用免疫组织化学方法，研究了孕鼠和大鼠性周期不同阶段垂体前叶内IL-8样免疫阳性物质表达的变化，以及大鼠体内雌激素水平变化对垂体前叶内IL-8样免疫阳性物质水平的影响.1材料和方法11/11雌性大鼠性周期不同时期的确定成年雌性SD大鼠20只（第四军医大学实验动物中心提供），通过阴道涂片观察到至少有2个稳定性周期以后，在适当的周期阶段（每个周期阶段5只大鼠）处死，取材，包埋.动物模型成年雌性SD大鼠20只，体质量200～230g，随机分为4个实验组，每组5只，分别为:①双侧卵巢摘除组（Ovariectomy，OVX

5、）;②双侧卵巢摘除加油剂对照组（OVX+Vehicle，OVX+V）;③双侧卵巢摘除加苯甲酸雌二醇组（OVX+E2）;④正常加苯甲酸雌二醇组（Normal，NOR+E2）.苯甲酸雌二醇（上海第九制药厂）的给药量为5μg・（只・d）-1（sc），溶于芝麻油（/只，于卵巢摘除次日起开始给药.正常鼠给药时间与卵巢摘除鼠给药时间同步，每日下午5:30～6:00给药，给药时间为14d.动物取材SD大鼠以戊巴比妥钠（30mg・kg-1）麻醉后，经左心室灌注生理盐水100～150mL至血液冲净，以肝叶发白为标志.迅速开颅，取垂体入Bouin’s固定液（饱和苦

6、味酸75mL+甲醛25mL+冰乙酸5mL）固定5h后常规石蜡包埋.从腹侧向背侧行6μm水平切片，隔5张取一张，贴于预先经铬矾明胶处理的载玻片，37℃烤箱过夜.常规脱蜡后，即可进行免疫组织化学染色.11/11免疫组织化学染色采用常规生物素-抗生物素-过氧化物酶复合物（ABC）方法.第1抗体为兔抗人IL-8（1∶2000，第四军医大学免疫学教研室提供）4℃孵育48h;生物素化的二抗（1∶500，Sigma公司），室温3h;过氧化物酶标记的抗生物素-生物素复合物（1∶500，Sigma公司），室温，DAB+μL・L-1H2O2显色，免疫阳性产物为棕黄

7、色.以PBS或正常血清替代一抗染色作为阴性对照.实验结果观察和数据处理用LEICAQ500MC图像分析系统，采用双盲法，输入方式为普通光源照明，显微镜放大倍数400倍，固定输入条件后，在高分辨图像监视器上每张切片中央部分随机抽取5个视野，选择合适的门限分割值，测定阳性细胞的平均灰度，每只动物取5张切片，计算其均值，以t检验法计算各组间差异.2结果┐8样免疫阳性物质在正常雌性大鼠垂体中的存在和分布正常雌性大鼠垂体前叶存在IL-8样免疫阳性物质，阳性染色物质存在于胞质.阳性细胞的分布有特殊规律.强染阳性细胞分布在垂体的边缘部分，中央部分则是一些染色

8、相对较弱的阳性细胞（Fig1）.11/11┐8样免疫阳性物质在妊娠大鼠垂体中的存在和分布妊娠10d雌鼠垂体前叶IL-8免疫染色与正常雌鼠相似;妊娠20