白细胞介素┐2mrna在大鼠垂体前叶的表达

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1、白细胞介素┐2mRNA在大鼠垂体前叶的表达【关键词】白细胞介素-2　　关键词:白细胞介素-2;垂体前叶;逆转录-聚合酶链反应;鼠　　摘要:目的研究白细胞介素-2（IL-2）mRNA在正常大鼠垂体前叶的表达.方法从正常大鼠垂体前叶组织和离体原代培养的细胞中提取总RNA，采用二步法RT-PCR技术，扩增出相应大小的DNA片段，将此片段通过凝胶电泳回收纯化后与pGEM-Teasy载体连接，转染到大肠杆菌细胞内，并接种于LB培养基中培养10～14h，挑选出阳性克隆进行DNA序列测定.结果测定的DNA与IL

2、-2基因片段相同.因而，在正常大鼠垂体前叶组织和培养细胞中都有IL-2mRNA的表达.结论首次证实了IL-2不仅存在于垂体肿瘤组织中，而且在正常垂体组织中也有表达.为进一步研究神经内分泌网络学说提供了一定的理论基础.　　KeyRNAinratnormalanteriorpituitary.METHODSTotalRNArats’normalanteriorpituitarytissuesandpri-maryculturedcellsinvitro.UsingthetplifiedaDNAfrag

3、mentinparativelythesamelengthasthatofIL-2mRNA.ThroughDNAa-garosegelelectrophoresis，thefragmentidbytheT4ligase.TheconnectedplasmidedintotheE.colicells.Thetransformedcellsp+LBculturemediumandculturedfor10～14h.ThepositivecloneseasthatoftheIL-2genefragmen

4、t.Therefore，thereexistedIL-2mRNAinrats’normalanteriorpituitarytissuesandculturedcells.CON┐CLUSIONItisproved，forthefirsttime，thatIL-2noton-lyexistsinthetissuesofpituitaryadenoma，butisalsoex-pressedinthenormalpituitarytissues.　　0引言　　白细胞介素-2（IL-2）对下丘脑-垂体

5、-靶腺具有明显的调节作用.外源性IL-2既可以直接作用于垂体组织，影响垂体激素的分泌，也可以通过调节下丘脑促垂体激素的释放，间接影响垂体激素的分泌［1，2］.近来发现，垂体瘤细胞在基础条件和不同的刺激条件下可以产生和分泌IL-2［3］，但是正常垂体组织是否存在IL-2还未见报道.我们拟应用RT-PCR方法，从基因水平确定大鼠正常垂体前叶中是否有IL-2表达.　　1材料和方法　　1.1材料胰蛋白酶为Difco公司产品，DMEM培养基及Trizol试剂为美国Gibco公司产品，新生小牛血清为杭州四季青

6、生物工程材料研究所产品，反转录试剂盒、PCR反应试剂盒及pGEM-T载体为美国Promega公司产品，T4DNA连接酶为华美生物工程公司产品，感受态细胞为本校基础部生物化学和分子生物学教研室惠赠，PCR扩增仪为英国JENCONS公司产品.　　1.2大鼠垂体前叶细胞原代培养雄性SD大鼠，体质量200～250g，用10g・L-1戊巴比妥钠（30mg・kg-1）腹腔麻醉后，20mL无菌生理盐水灌注，迅速浸入750mL・L-1乙醇中5～10min，于无菌条件下开颅

7、取出垂体，剔除后叶及中间叶.前叶经D-Hank’s液冲洗4次后，切成小于1mm×1mm×1mm组织块，1.25g・L-1胰蛋白酶37℃振荡（100r・min-1）温育30min.用吸管吹打分散细胞，将细胞悬液吸入加有完全培养液的离心管，终止消化（若消化不完全可将其余组织重复消化1～2次）.于200g离心10min，弃上清液后，向沉淀的细胞团滴加含100mL・L-1小牛血清的DMEM培养液使其重悬并分散，种植于90mm2培养皿，50mL・L-1

8、CO2和37℃恒温培养箱中培养5～7d，待行总RNA的提取.　　1.3总RNA的提取用10g・L-1戊巴比妥钠（30mg・kg-1）腹腔麻醉后，100mL无菌生理盐水灌注，立即开颅显露垂体，去除后叶及中间叶.将前叶置入预先装有1mL冰预冷的Trizol液的匀浆器中，充分匀浆裂解后（上述培养5～7d的细胞，可直接将1mLTrizol加到培养皿中，并轻摇培养皿至显微镜观察细胞全部漂浮在液体中为止，其余步骤相同），移入1.5mL离心管中，室温静置5min，加入