红细胞计数血红蛋白定量

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1、1.红细胞手工显微镜计数法：原理、改良Neubauer计数板的结构、操作方法、结果计算及注意事项。2.血红蛋白测定：氰化高铁血红蛋白(HiCN)测定法十二烷基硫酸钠血红蛋白测定法3.红细胞计数和血红蛋白测定的参考值及临床意义。内容细胞计数方法显微镜细胞计数法细胞计数仪法直接计数法间接计数法（比值计数法）显微镜细胞直接计数法将标本作适当稀释(或浓缩)后直接在显微镜下计数一定容积内的细胞，经换算可知单位体积标本中的细胞数。一、原理二、应用常用于血细胞计数、尿沉渣定量分析、脑脊液细胞计数、浆膜腔积液细胞计数、精子计数等。显微镜细胞间

2、接计数法一、原理二、应用将待测标本制成涂片，经适当染色后，显微镜下计数待测细胞的相对比值，结果以分数或百分率表示，或换算成单位体积标本中的细胞数。常用于白细胞分类计数、网织红细胞计数和点彩红细胞计数等。红细胞发育过程原红早幼红中幼红晚幼红网织红红细胞骨髓造血干细胞Epo红系祖细胞erythrocyteredbloodcell红细胞检查红细胞计数（RBC）血红蛋白测定（Hb,HGB）红细胞形态检查血细胞比容测定（Hct,HCT,Ht,PCV）网织红细胞计数（Ret,RET）点彩红细胞计数红细胞沉降率测定（ESR）红细胞平均指数红

3、细胞体积分布宽度红细胞检验的意义贫血的诊断和形态学分类骨髓造血功能评价与疗效观察动态观察疾病的变化治疗监测与安全防护手工显微镜法用等渗稀释液将血液稀释一定倍数，充入计数池中，于显微镜下计数一定体积内的红细胞数，经过换算求得每升血液中的红细胞数量。一.原理红细胞计数(redbloodcellcount,RBC)1.显微镜二.器材2.微量吸管3.计数板：改良Neubauer计数板RBC计数氯化钠1.0g结晶硫酸钠5.0g氯化高汞0.5g蒸馏水加至200ml三.试剂赫姆氏（Hayem）红细胞稀释液氯化钠：调节渗透压硫酸钠：提高比密，

4、防止红细胞粘连。氯化高汞：防腐剂手工显微镜法红细胞计数(RBC)四.方法1.小试管加RBC稀释液2.0ml。2.采血，取血10ul。3.擦去管外的血，轻吹入试管底部，再清洗吸管2~3次，立即混匀。4.混匀后充入计数室，静置3~5min，高倍镜下计数。手工显微镜法红细胞计数(RBC)充液位置充液位置为红细胞计数区域压线细胞的计数原则：数左不数右，数上不数下五.计算RBC/L＝5个中方格内RBC数×5×10×200×106＝5个中方格内RBC数/100×1012六.报告方式×1012／LRBC：手工显微镜法红细胞计数(RBC)七.

5、参考值男性：(4.0～5.5)×1012／L女性：(3.5～5.0)×1012／L新生儿：(6.0～7.0)×1012／L400～550万/ul350～500万/ul手工显微镜法红细胞计数(RBC)八.注意事项1.采血时不要过分挤压。2.取血量必须准确，动作要迅速，防止血液凝固。3.血液加入稀释液后，应立即混匀。4.充池前要摇匀，充池时不能产生气泡。5.压线细胞应数上不数下，数左不数右。手工显微镜法红细胞计数(RBC)计数误差技术误差固有误差：仪器误差计数域误差质量控制1避免技术误差，纠正仪器偏差2缩小计数域误差3排除异常标本

6、的干扰4室内、室间质量评价亚铁血红素亚铁血红素珠蛋白亚铁血红素亚铁血红素血红蛋白结构示意图（原卟啉、Fe2+）（原卟啉、Fe2+）（原卟啉、Fe2+）（原卟啉、Fe2+）（Hemoglobin，Hb或HGB）珠PrNNFeNN亚铁血红素结构示意图O2HbA：α2β2成人占95%以上正常血红蛋白的种类(根据珠蛋白肽链的组成)HbA2：α2δ2成人约占2～3%HbF(胎儿Hb)：α2γ2成人1%以下HbO2(氧合血红蛋白)各种血红蛋白衍生物(据铁原子第六配位键的结合情况)Hbred(还原血红蛋白)HbCO(碳氧血红蛋白)Hi(高铁

7、血红蛋白)SHb(硫化血红蛋白)主要成分少量与氧结合未结合与CO结合Fe2＋→Fe3＋与S结合氰化高铁血红蛋白测定法（HiCN法）碱羟高铁血红素法（AHD575法）十二烷基硫酸钠血红蛋白法(SDS-Hb法)比色法血红蛋白测定方法一.原理Hb＋CN－氧化HiCN为棕红色，最大吸收峰540nm。根据标本的吸光度可知Hb浓度。HiCNHi氰化高铁血红蛋白测定法(HiCN法)注：硫化血红蛋白(SHb)不能被转化氰化钾0.05g高铁氰化钾0.2g磷酸二氢钾0.14g非离子表面活性剂1.0ml蒸馏水加至1000ml二.试剂HiCN转化液(

8、文齐液)调pH7.0～7.4，置棕色玻璃瓶中密封保存。氧化调节pH促溶,防混浊提供CN-氰化高铁血红蛋白测定法(HiCN法)三.方法4.实际工作中，可用HiCN参考液，按生化方法绘制标准曲线，或求出K值后计算。K＝∑Hb（g）/∑A1.5.0mlHb转化液＋血20ul,混匀,