人胎不同发育时期肠系膜淋巴结淋巴细胞的凋亡.doc

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1、人胎不同发育时期肠系膜淋巴结淋巴细胞的凋亡作者：李红苏敏胡蓉黄悦【摘要】目的：探讨不同时期人胎肠系膜淋巴结淋巴细胞凋亡。方法：收集人胎35例，采用常规组织学HE染色、免疫组织化学细胞凋亡（TUNEL法）染色和细胞计数法进行研究。结果：9周，人胎肠系膜淋巴结原基内未见凋亡的淋巴细胞。11~12周，有极少量淋巴细胞凋亡，13~32周，各胎龄段均有淋巴细胞凋亡。凋亡的淋巴细胞呈单个分布且多被巨噬细胞所吞噬。经统计学处理，各胎龄段淋巴细胞凋亡数差异无显著性（P＞0.05）。结论：（1）淋巴细胞凋亡是人胎肠系膜淋巴结发

2、育过程中的普遍现象；（2）人胎发育时期，肠系膜淋巴结通过细胞凋亡方式对淋巴细胞的发育有一定筛选作用。【关键词】淋巴结；肠系膜；人；胎儿；淋巴细胞；凋亡［Abstract］Objective:Tostudytheapoptosisoflymphocytesinmesentericlymphnodes（MLNs）duringdifferentstagesofhumanfetusdevelopment.Methods：Thirty-fivehumanfetuseswerecollected.TheHermatoxy

3、lin-Eosin（HE）staining，immunohistochemistryapoptosismethod(in-situdT,dT-mediateddUTPnicklabeling，TUNEL),andcytometrywereusedinthisstudy.Results：Atthe9thweekoffetalage,noapoptosislymphocytewasseenintheprimordiumoftheMLNs.In11~12weeksoffetaldevelopment,afewofa

4、poptosislymphocytescouldbefound.Obviousapoptosislymphocyteswereobservedfromthe13rdweektothe32ndweek.Theyoccurredsinglyandwerephagocytizedbymacrophage.Buttherewasnotdistinctdifferencebetweeneachstageofthedevelopingfetuses(P>0.05)．Conclusions：(1)Theapoptos

5、isoflymphocytesisacommonphenomenonduringMLNsgrowthinhumanembryodevelopment;(2)Duringthedevelopmentofhumanfetus,theMLNshavescreeningfunctiontolymphocytesthroughapoptosis.［Keywords］lymphnodes；mesentery；persons；fetus；lymphocyte；apoptosis细胞凋亡（apoptosis）不仅发生在一些疾

6、病过程中，在胚胎发生、器官发育等方面也有重要的作用[1，2]。目前淋巴细胞的凋亡已有较多报道，但多侧重于对动物在体或离体及人离体淋巴细胞的研究，然而在人胎肠系膜淋巴结（mesentericlymphnodes,MLNs）发生过程中淋巴细胞凋亡的动态情况如何[3，4]？为此，于2005年1月拟探讨人胎儿MLNs不同时期相关淋巴细胞凋亡的变化规律，以期对人胎肠系膜淋巴结的发生和腹腔内免疫防御的研究提供形态学资料。41材料与方法1.1材料收集因故中止妊娠的人胎35例,各例均测量顶臀长（crown-rumplengt

7、h，CRL）,按Patten[5]标准确定胎龄（表1）。表1胎龄、顶臀长及例数分布1.2主要试剂TUNEL（In-situdTdT-mediateddUTPnicklabeling）法染色细胞凋亡检测试剂盒（InsitucellapoptosisdetectionkitI,POD）和显色剂（Diaminobenzidine,DAB），均由武汉博士德生物制剂公司提供。1.3方法各例均取部分肠系膜淋巴结，用10％Formalin固定，常规石蜡包埋，制成4μm连续切片。进行常规HE染色和免疫组织化学TUNEL法染色

8、。　　免疫组织化学TUNEL法染色主要步骤：切片脱蜡下行入水，入3%H2O210min，蒸水洗5min，3次，依次加入标记缓冲液和标记液37℃孵育120min，TBS洗3min，3次，加入封闭液，封闭液1∶100稀释生物素化抗地高辛抗体37℃孵育30min，TBS洗3min，3次，TBS1∶100稀释SABC，37℃孵育60min，TBS洗5min，3次，DAB-H2O2液显色，中性树胶封片。　　方