大鼠脑挫伤后hif-1α蛋白表达的法医学研究

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1、大鼠脑挫伤后HIF-1α蛋白表达的法医学研究　　【摘要】目的探讨大鼠脑挫伤后HIF—la蛋白表达的规律。方法参照Feeney，S法建立大鼠脑挫伤模型，分　　别于伤后2h，6h，12h，24h，2d，3d，5d，7d，14d取脑，运用免疫组化SABC法观察HIF—la蛋白的表达。结果对照组偶见　　阳性反应细胞。损伤后2h，即可观察到HIF—la蛋白表达。6h后表达明显增强，24h达高峰，随后阳性反应细胞逐渐减　　少，7d后仍可见少量表达，14d后恢复。表达呈弥漫性，以大脑皮层、海马、脑干最为明显，不同部位的变化趋势一致。　　各实验组与对照

2、组比较有统计学意义(P0．05o　　讨论　　HIF一1是在研究缺氧诱导促红细胞生成素　　(erythropoietin，EPO)基因表达时发现的，是一类由　　两个亚单元HIF一1仅、HIF一113组成的异二聚体，其中　　HIF一1仅由826个氨基酸组成．分子量约120kD，　　含有两个转录激活区(transactivationdomains，　　TADs)，一个称作N一末端激活区(N2terminalactiva．　　tiondomain。NAD)。另一个称作C一末端激活区(C—　　terminalactivationdomain，CA

3、D)。另夕，HIF一1仅还　　含有一个独特的氧依赖降解区域(oxygen—dependent　　degradationdomain，ODD)．在控制HIF一1仅稳定方　　面起关键作用llI21。HIF一1仅在常氧状态下经泛素一蛋　　白酶体途径被迅速降解，当机体处于低氧环境时，细　　胞周围的氧分压降低，HIF—la降解受阻，在胞浆中　　累积．并核转位到细胞核中与HIF一113结合形成有　　活性的HIF一1。HIF—l仅与靶基因启动子或增强子缺　　氧反应元件(hypoxia～responseelement，HRE)上的5　　一A／GCGTG

4、一3序列结合进而调节靶基因的表　　·　　78·法律与医学杂志XX年第14卷(第1期)　　照片l伤后2h出现HIF—l阳性表达；照片2伤后6hHIF-la阳性表达明显增加；照片3伤后24h，阳性表达达高峰；照片4伤后7d少　　量阳性细胞表达。Ph0t01．Theexpre~ionofHIF—lap~teinat2haftercerebralcontusion(SABCx200)；Pho~2．HIF—lapo~tive-cells　　andtbeinteIlsity0fstainincreasedremarkablyinnumberat6h

5、afterbrainiury(SABcx200)；Pho~3．Theinte璐ityandtheareaof　　HW-lapositivecellsp~kedat24hafteruf(SABCx200)；Photo4．~tfleexpressionWaSfoundat7dafteriury(SABCx200)　　达。HIF一1o【作为低氧应答的全局性调控因子，能够　　激活100多种低氧适应性基因的表达。HIF—l对基　　因表达调节的广泛作用涉及血管发生、血管重塑、红　　细胞生成、糖酵解等各个方面，因此是机体对氧浓度　　改变的一系列自适应

6、反应中最重要的调节因子。　　脑挫伤后，脑组织缺血缺氧所致的氧化应激可　　以诱导HIF—lo【的表达升高，从而促使细胞凋亡，防　　止细胞坏死甚至能够刺激细胞增殖。Freret等[引在大　　鼠脑持续缺血损害24h后人工给予可诱导HIF一1　　表达，增加的药物去铁铵，结果发现可以显著降低脑　　组织缺血后损害的面积(一28％)，这提示HIF一1仅有　　脑保护作用。实验表明HIF一1仅蛋白在脑血肿周边　　神经细胞中有明显的表达，且随着出血时间的延长　　HIF一1d表达的阳性率逐渐增加，提示HIF—lo【的表　　达与神经细胞缺血、缺氧的时间密切相关

7、。于如同等　　报道创伤性脑损伤后HIF一1o【表达明显增高，细　　胞凋亡率明显降低，在伤后3h，大脑皮质、海马等部　　位HIF—l表达增加，24～48h达到高峰。提示HIF—　　l仅与创伤性脑损伤后神经细胞凋亡有关。　　本研究对脑挫伤后不同时间引起HIF一10【蛋白　　的变化进行了观察．结果发现伤后2hHIF一1仅阳性　　表达较弱，6h后HIF一1阳性表达的神经细胞逐渐　　增多。随着时间的增加，HIF一1仅阳性表达的神经细　　胞增多。以神经胶质细胞为主，表达强度增加，表达　　部位以损伤区周围大脑皮质、脑干、海马为主。因损　　伤区、脑干和

8、海马都是对缺血缺氧敏感的组织，这也　　证实HIF一1与脑损伤后缺血缺氧有关。脑挫伤后　　神经细胞处于缺血缺氧敏感期，可通过抑制蛋白酶　　体降解HIF一1仅和提高HIF一10【的转录活性两种途　　径．实现HI