【食药用真菌】第4章_食用菌的菌种制作与保藏课件

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1、第4章食用菌的菌种制作与保藏概念：菌种(spawn)是指在适宜基质上生长良好并以充分蔓延，可以作为食用菌生产的种源菌丝体。一、菌种类型和生产流程菌种类型：按培养基的形态分：（1）固体菌种（2）液体菌种按菌种的来源、繁殖代数分：母种（一级种）、原种（二级种）、栽培种（三级种）1.母种母种系指由孢子、子实体组织、菇（耳）木或基质菌丝分离纯化，并在试管培养基上繁殖的菌丝体、芽孢及其培养基质。母种经出菇试验后可用于生产称为一级种。2.原种原种系指由母种扩大移植于固体或液体培养基上繁殖的菌丝体。亦称二级种。3.栽培种栽培种系指由原种扩大移植于固体或液体培养基上繁殖的菌丝体

2、。亦称三级种。通常以菌种瓶或菌种袋为容器。菌种生产流程菌种分离（孢子、子实体、菇木等）培养基制备→高压灭菌→接种→母种→出菇试验→一级种培养基制备→高压灭菌→接种（常压灭菌）原种（二级种）培养基制备→高压灭菌→接种（常压灭菌）栽培种（三级种）大规模生产或工厂化生产一）孢子分离法1）种菇的选择标准：菌株性状优良、发育健壮、无病虫害、熟度适当。2）种菇的表面消毒：草菇、蘑菇可用0.1%升汞溶液浸泡2-min进行表面消毒，香菇、平菇用75%酒精进行表面消毒。二、菌种分离方法（1）多孢分离法整菇播种法（孢子收集器）钩悬法贴附法褶上抹取孢子法孢子印分离法空中孢子捕捉法3）

3、方法:孢子→PDA孢子分离图（2）单孢分离法二）组织分离法子实体分离：选择优秀的子实体→75%酒精表面消毒→掰开菇体→菌柄和菌盖处切取组织→接入斜面。菌核分离法：同子实体分离。菌核有猪苓、茯苓、雷丸等。连续稀释法3.菌索分离法：蜜环菌菌索→75%酒精表面消毒→去掉黑色外皮层（菌鞘）→切下白色菌髓→接入斜面。三）基内菌丝分离法菇木（耳木）分离法：选择菇木→清洗表面→锯下一段→干燥→中间挖取一小块（无菌操作）→接入斜面（见图）。代料基质分离法：同菇木分离。二）组织分离法（续）菇木、耳木分离法四）土中菌丝分离法采集菇体下与菇根相连的菌丝束→无菌水冲洗干净→无菌纱布吸干

4、→切下菌丝束→接入斜面（培养基含有抗生素）→出菇鉴定。本方法适用于野外分离野生菇类。宏观检查：用肉眼或放大镜检查菌丝体的颜色、粗细、生长速度和致密度，有无爬壁现象、菌丝老化是否分泌色素、菌丝在试管斜面上是否能形成原基。微观检查：利用显微镜对菌丝形态特征进行观察，如菌丝粗细是否均匀、有无锁壮联合、菌丝的分支情况。四、菌种的检验四、菌种保藏方法及复壮技术一）菌种保藏方法原理：菌种保藏的基本手段是采用低温、冷冻、干燥、减少供氧量等方法，终止菌丝生长，降低菌丝的代谢强度，使菌丝处于休眠状态。主要保存方法有：方法：菌丝长满斜面（PDA）硫酸纸包扎试管口存于4℃冰箱保存时间

5、：180-360天，适合于短期保存。缺点：1）培养基容易失水；2）棉塞易长霉菌；3）转接次数多，菌株易产生变异。解决方法：1）增加琼脂的含量及加大培养基的用量；2）以无菌胶塞代替棉塞或将棉塞齐管口处剪平之后再用石蜡封口。1.斜面低温保藏法2.木屑保藏法方法：木屑培养基（78%木屑、20%麦麸、1%糖、1%石膏。）→装入试管的2/3→高压灭菌→接种→菌丝长满→存于4℃冰箱。保存时间：1-2年。适合于木腐菌的保藏。3.液体石蜡保藏法方法：无水液体石蜡（化学纯）→高压灭菌→冷却→注入斜面至高出斜面1cm处→置于4-15℃保存。保存时间：3-5年。转接时无须倒掉石蜡，直

6、接挖出一块，开始时菌丝生长缓满，转接1-2次后就能恢复正常。原理：石蜡能抑制生物代谢、推迟细胞衰老、隔绝氧气交流、防止培养基水分蒸发。4.菌丝球保藏法方法：液体培养基→接种→摇菌→菌丝球形成→菌球接入无菌生理盐水试管中→塞紧胶塞→常温下保存。保存期：1年以上。5.液氮超低温保藏法方法：取平板上的菌丝约5mm2置于冻存管中→加入1mL的10%的甘油或10%二甲基亚砜→液氮里保存。保存时间：长期保存。二）菌种复壮技术1.组织分离法2.改变培养基3.菌丝体复壮法：菌丝尖端分离