基于抗氧化活性的丹参药材质量评价

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1、基于抗氧化活性的丹参药材质量评价吴宏伟，杨洪军中国中医研究院中药研究所，北京100700摘要：目的探讨从药效角度评价药材质量的方法．方法采用DPPH法对10个产地丹参药材抗氧化能力进行评价，评价结果与药材中总丹酚酸类成分的含量进行比较。结果不同产地的丹参具有不同的抗氧化能力，其能力的强弱与总丹酚的含量成正比．结论采用DPPtt法可以从抗氧化方面简便、快捷的评价丹参药材的质量．关键词：丹参；抗氧化；DPPH；质量评价中药的质量控制目前主要以化学方法控制为主，通过一个或几个成分的含量来评价药材的质量，然而一方面有

2、效成分难以确定，另一方面几个有效成分的含量能否全面反应药材的质量仍需进一步研究，因此建立成分与活性之间的关系是中药质量评价的关键问题之一，甚至以简单、可靠的药效指标直接评价药材的质量也是很好的研究方法。DPPHnl是一种很稳定的以氮为中心的自由基，为体外评价物质抗氧化能力常用方法之一。若受试物能清除它，则提示受试物可能具有降低羟自由基、烷自由基或过氧自由基的有效浓度和打断脂质过氧化链反应的作用。丹参为中药活血化淤常用药乜1，现代药理研究表明其在心血管及抗氧化方面有活性。因此可以通过测定丹参药材清除DPPII自

3、由基的能力从抗氧化的角度来评价丹参药材的质量。1实验材料1．1样品及试剂DPPH(1。卜二苯基一2咕肼基自由基)，Sigma公司产品。10个产地的丹参药材(由本中药所李曼玲老师提供)。3971．2仪器Uv—T6新世纪紫外分光光度器，KQ-500E型医用超声波清洗器(昆山市超声仪器有限公司)，Sartorius万分之一电子天平；2实验内容2．1清除DPPII自由基的检测方法州1分别精密吸取各待测液2ml，加入2mL的DPPH溶液(0．084mg／aL)，摇匀后放置30min，以溶剂为空白对照，测定517nm处的

4、Abs值A1；同时测定上述待测液2mL与2mL空白溶剂混合后517nm的Abs值记为A2：再测定2mLDPPH溶液与2mL空白溶剂混合后517nm的Abs值记为A3：将三值根据下式计算对DPPH自由基的清除率。清除率(％)=[1一(A1一A2)／A3]×100％。2．2丹参提取液对DPPH自由基清除率的测定2．2．1线型范围考察一取DPPH母液(0．084mg／mL)，分别稀释成下系列浓度0．0525、0．042、0．0336、0．0315、0．0252、0．021、0．0168，测定吸光度；以吸光度为X值，

5、浓度为Y值进行线型回归，回归方程为：Y=23．443％-0．0009，R'--O．998。结果表明：DPPH含量在0．0525-0．0168mg／mL之间，浓度与吸光度成线性相关。2．2．2丹参提取溶剂的确定：精密称定0．59丹参药材(粉碎，过20目筛)，分别加入95％、50％、30％篚J7,醇50mL，称定，超声30min，补重．再精密吸取lmL稀释100倍后作为待测液按2．1项下进行测定。(结果见表1)表l、不同浓度乙醇丹参提取液的对DP阴自由基的清除率(％)(x士sn=3)乙醇浓度30％50％95％河北

6、承德家种40．81±1．5243．13±0．8614．69±0．87-_—____—_——___—·—_____—_'_——__●_，_———!—!-!_!_I—-————’—_●●—=●●!●由表1可以看出30％、50％乙醇提取液清除DPPH自由基的能力明显强于95％乙醇，故确定乙醇提取浓度为50％。2．2．3提取时间的考察精密称定0．59丹参药材(粉碎，过20目筛)．分别加入50％的乙醇50mL，称定，超声15、30、45min，补重，再精密吸取lmL稀释100倍后按2．1项测定。(结果见表2)表2、不同

7、提取时间丹参提取液对DPPH自由基清除率(％)(x士Sn_3)提取时间15min30min45min河北承德家种23．17±1．8942．32+2．1742．11±1．45由上表可以确定超声提取30min丹参提取液对DPPH自由基的清除率达到最大。2．2．4反应时间的考察哺1精密称定0．59丹参药材(粉碎，过20目筛)，加入50％的乙醇50mL，称定，超声30min，补重．再精密吸取ImL稀释100倍后按2．1项下进行测定，但测定时间从反应后立即测定。由图2可以看出，随着反应时间的延长，吸光度逐渐缓慢减小，1

8、20min后反应仍在进行，说明丹参提取液清除DPPH自由基是一个缓慢的过程。本实验把反应时间定在加入DPPH溶液后半小时测定，以保证每个样品的一致性。图2丹参提取液与DPPH液反应时间图2．2．5不同产地丹参药材的测定M取10个产地丹参药材，粉碎过20目筛后，分别精密称定O．59，加入50％的乙醇50mL，称定，超声30rain后补重．再分别稀释20、50、100、200、400、800倍后，按2．