实验七 抑制剂和ph对酶活性的影响

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1、实验七pH对酶活性的影响一、目的要求1.了解pH对酶活性的影响2.掌握试验pH对酶活性影响的原理及方法二、原理酶的活力受环境的pH的影响极为显著。通常只在一定的pH范围内才表现它的活性。一种酶活性表现最高时的pH值为该酶的最适pH，低于或高于最适pH时，酶的活性渐次降低。不同酶的最适pH不同．本实验以枯草杆菌α—淀粉酶来说明pH对酶活性的影响。三、试剂与器材试剂：l.0.5％可溶性淀扮溶液，新鲜配制。2.α—淀粉酶稀释液。3.0.2M磷酸氢二钠溶液：称取Na2HPO4·2H2O35.51克，溶于水，定容至100ml

2、。4.0.1M柠檬酸溶液：称取C6H8O7·H2O21.01克，溶于水中，定容至l000ml。5．碘—碘化钾溶液器材：1.试管及试管架2．恒温水浴锅3．吸管10ml2支,5ml8支，2ml2支4.白瓷调色板l块四、操作1．取8支试管，编号，用移液管按下表比例添加0.2M磷酸氢二钠溶液和0.1柠檬酸溶液，制备pH为4.4～7.2的缓冲液。试管号码0.2M磷酸氢二钠(ml)0.1柠檬酸溶液(ml)pH14.415.594.424.935.074.835.364.645.245.804.205.656.323.686.0

3、66.933.076.477.732.276.888.701.307.22．取9支试管，编号，将上述8种缓种液分别吸取3ml，分别加入相应号的试管中（第1～8号）。第9号试管加pH5.6的缓冲液3ml。然后再向各试管添加0.5％可溶性淀粉溶液2ml。将9支试管放入37℃恒温水浴中预热5～10分钟。3．向第9号试管添加α—淀粉酶稀释液2ml，摇匀，仍在37℃温水浴中保温。1分钟后，每隔15秒钟自第9号试管中取出一滴混合液，置白瓷板空穴中，以碘—碘化钾溶液试之，检验淀粉水解的程度，待结果呈橙黄色时，取出试管记下酶作用的

4、时间（自加入酶液时开始）。注意：掌握第9号试管的水解程度是本实验成效的关键。4.以上l分钟的间隔，依次向第l～8号试管加入。α—淀粉酶稀释液2ml，摇匀，并仍在37℃恒温水浴中保温。然后，按紧9号管酶作用的时间，依次将各管取出，并立即加入碘—碘化钾溶液2滴，观察各管呈现的颜色，并说明之。五、思考题：1.pH对酶活性影响的机理2.掌握试验pH对酶活性影响的原理及方法3.如果要定量测定pH对酶活性影响方案如何设计？实验七酶的激活剂和抑制一、目的要求1.了解激活剂和抑制剂对酶活性的影响2.掌握试验激活剂、抑制剂对酶活性影

5、响的原理与方法二、原理酶的活性常受某些物质的影响，有些物质能使酶的活性增加，称为酶的激活剂物质能使酶的活性降低，称为酶的抑制剂。激活剂和抑制剂影响酶作用的需要量很少，常有特异性。本实验以唾液淀粉酶为例，说明氯离子对该酶的激活作用以及铜离子对该酶的抑制作用。三、试剂与器材试剂：l.0.5%可溶性淀粉溶液，新鲜配制。2.1%NaCl溶液。3.0.5%CuSO4·5H2O溶液。4.唾液淀粉酶液：实验者先有清水漱口后，取唾液lml，稀释100倍左右。5.碘一碘化钾溶液。器材：1.试管及试管架2.恒温水浴锅3.吸管5ml1支

6、，lml4支四、操作1.取3支试管，编号后各加入3ml0.5％可溶性淀粉溶液及1ml稀释唾液．1号试管加lml1％氯化钠溶液。第2号试管加lml0.5％硫酸铜溶液，第3号试管加lml蒸馏水。2.将上述3支试管，放入37℃恒温水浴中保温10～15分钟后取出（保温时间因唾液淀粉酶活力而异，重做一次，以求明显之结果）。冷却后分别加入4～5滴碘一碘化钾溶液。观察比较三支试管颜色的深浅，并解释之。五、思考题：1.回忆激活剂与抑制剂的分类。2.掌握激活剂，抑制剂对酶活性影响的方法。3.如果定量测定激活剂抑制制对酶活性的影响方案

7、如何制定？