hbmscs诱导分化类髓核细胞

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1、万方数据·1470··干细胞与组织工程·ChineseJournalofReparativeandReconstructiveSurgery,December2008，V01．22，No．12hBMSCs诱导分化类髓核细胞丰干钧1刘浩1陈晓禾2李秀群2赵献峰1梁涛1【摘要】目的探讨人椎间盘细胞和关节软骨细胞的分子表型差异，分析hBMSCs经TGF．p，和BMP．7联合诱导后能否分化为软骨细胞和髓核细胞。方法取9例自愿捐赠者髂嵴骨髓20～40mL分离培养hBMSCs。取第4代hBMSCs行三维微球培养。根据基础培养基中加入的生长因子不同，实验分成4组，分别为加入10ng

2、／mLTGF．B，组(A组)、200ng／mLBMP．7组(B组)、同时加入两种生长因子组(C组)以及空白对照组(D组)。于培养后21d，行组织学及免疫组织化学观察：于培养后4、21d进行PCR检测I、II、X型胶原、蛋白多糖和SOX9基因的表达。结果培养后2ld，HE染色示A组和C组细胞呈软骨细胞样形态特征，甲苯胺蓝染色及免疫组织化学染色II型胶原表达呈阳性。B组和D组细胞形态无明显改变，PCR检测示培养后21d，A、C组SOX9、蛋白多糖、I型胶原及II型胶原表达较4d时明显增加(P<0．05)。B、D组I型胶原表达较4d时明显增加(户<0．05)，SOX9、蛋白

3、多糖及II型胶原较4d时无明显变化(P>0．05)。其中仅A组X型胶原表达呈阳性。结论TGF．13，和BMP．7联合应用能促进hBMSCs分化更接近于椎间盘细胞，可能为椎间盘组织工程提供种子细胞。【关键词】椎间盘组织工程hBMSCs诱导分化BMP．7TGF．B，软骨形成中图分类号：R318Q813文献标志码：ADIFFERENTIATIONOFINTERVERTEBRALNUCLEUSPULPOSUS-LIKECELLSFROMhBMSCs／FENGGanjunl．LIUHa01，CHENXiaohe2,LIXiuqun2,ZHAOXianfeng／，LIANGTa0

4、1．1D印aamentofOrthopaedics,2DivisionofStemCellandTissueEngineering,StateKeyLaboratoryofBiotherapy,WestChinaHospit甜，SichuanUniversity,ChengduSichuan，610041．P．R．China．Correspondingauthor：LIUHao，E—mail：Liuha06304@163．com【Abstract】ObjectiveTocomparethemolecularphenotypeofhumanintervertebrald

5、isccellsandarticularchondrocytesandtoanalyzewhetherhBMSCscandifferentiateintobothchondrocytesandnucleuspulposuscellsaftercombinedinductionofTGF一13，andBMP一7invitro．MethodsThecellswiththecharacteristicsofhBMSCswereisolatedfrommarrowaspiratesofthevolunteerdonors’iliaccrest．Humanbonemarroww

6、asremovedandfractionated，andadherentcellcultureswereestablished．The4thpassagecellswerethentranslatedintoanaggregateculturesysteminaserum—freemedium．ThepelletculturesofhBMSCsweredividedintofourgroups：10ng，mLTGF-133group(groupA)，200ng／mLBMP．7group(groupB)，combinationgroupofTGF-133andBMP一7

7、(groupC)andblankgroupasthecontrol(groupD)．Histologicalobservation，RT-PCRandRQ—PCRwereappliedtomeasuretheexpressionsofcollagentypeI，II，X，aggrecanandSOX9onthe4thand21stdayaftercellinduction，respectively．ResultsAswasshownbyhistologicalobservation，theinducedcellsexpressedthefeature