SNT2423-2010动物源性食品中甲砜霉素和氟甲砜霉素药物残留检测方法微生物抑制法.pdf

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1、中华人民共和国出入境检验检疫行业标准犛犖／犜２４２３—２０１０动物源性食品中甲砜霉素和氟甲砜霉素药物残留检测方法微生物抑制法犇犲狋犲狉犿犻狀犪狋犻狅狀狅犳狋犺犻犪犿狆犺犲狀犻犮狅犾犪狀犱犳犾狅狉犳犲狀犻犮狅犾狉犲狊犻犱狌犲狊犻狀犪狀犻犿犪犾犱犲狉犻狏犲犱犳狅狅犱—犕犐犃犿犲狋犺狅犱２０１００１１０发布２０１００７１６实施中华人民共和国发布国家质量监督检验检疫总局犛犖／犜２４２３—２０１０前言本标准的附录Ａ为规范性附录。本标准由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。本标准起草单位：中华人民

2、共和国广东出入境检验检疫局、中华人民共和国湛江出入境检验检疫局。本标准主要起草人：王志强、李志勇、许龙岩、凌莉、陈宗辉、陈春梅。本标准是首次发布的出入境检验检疫行业标准。Ⅰ标准分享网www.bzfxw.com免费下载犛犖／犜２４２３—２０１０动物源性食品中甲砜霉素和氟甲砜霉素药物残留检测方法微生物抑制法１范围本标准规定了动物源性食品中甲砜霉素和氟甲砜霉素药物残留检测的微生物抑制法。本标准适用于肉类、鱼、虾和牛奶中甲砜霉素和氟甲砜霉素药物残留筛选检测。２规范性引用文件下列文件中的条款通过本标准的引

3、用而成为本标准的条款。凡是注日期的引用文件，其随后所有的修改单（不包括勘误的内容）或修订版均不适用于本标准，然而，鼓励根据本标准达成协议的各方研究是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本标准。ＧＢ／Ｔ６６８２分析实验室用水规格和试验方法３设备和材料３．１设备３．１．１电子天平：灵敏度为０．０１ｇ。３．１．２高速离心机。３．１．３高速组织捣碎机www.bzfxw.com。３．１．４涡旋振荡器。３．１．５恒温水浴锅。３．１．６游标卡尺：测量范围０ｍｍ～２００ｍｍ，精度

4、０．０２ｍｍ或抑制圈测量仪。３．１．７灭菌平皿：直径９０ｍｍ，底部平整的玻璃或一次性塑料灭菌平皿。３．１．８圆形滤纸片：直径１０ｍｍ，厚１．１ｍｍ。日本ＴｏｙｏＲｏｓｈｉＫａｉｓｈａ，Ｌｔｄ．产品或相当者。３．１．９５０ｍＬ离心管。３．１．１０可调移液器：１０μＬ～１００μＬ，１００μＬ～１０００μＬ。３．１．１１恒温箱：３７℃±１℃。３．１．１２麦氏比浊计。３．２菌种和培养基３．２．１藤黄微球菌犕犻犮狉狅犮狅犮犮狌狊犾狌狋犲狌狊ＡＴＣＣ９３４１。３．２．２纯化及传代培养基（ＴＳＡ）：见附录Ａ第

5、Ａ．１章。３．２．３检定用培养基：抗生素培养基１号（ＡＭＩ）见附录Ａ第Ａ．２章。３．３试剂本方法所用化学试剂为分析纯，试验用水为蒸馏水或去离子水，试验用水应该符合ＧＢ／Ｔ６６８２中一级水的规定。３．３．１狆犎６．０磷酸盐缓冲液ｐＨ６．０磷酸盐缓冲液：称取８．０ｇ磷酸二氢钾（ＫＨ２ＰＯ４）及２．０ｇ磷酸氢二钾（Ｋ２ＨＰＯ４），用蒸馏水溶解并定容至１０００ｍＬ，１２１℃高压灭菌１５ｍｉｎ。３．３．２狆犎６．０磷酸盐缓冲液乙腈提取液ｐＨ６．０磷酸盐缓冲液和乙腈按２∶３体积比制备。１犛犖／犜２４２３—

6、２０１０３．３．３甲砜霉素标准储备液称取一定量的甲砜霉素标准品，用甲醇溶解并定容至１０００μｇ／ｍＬ，置２℃～８℃冰箱保存，贮存期６个月。３．３．４甲砜霉素标准工作液吸取一定量的甲砜霉素标准储备液，用ｐＨ６．０磷酸盐缓冲液稀释成０．０１μｇ／ｍＬ的标准工作液，应当日配制使用。３．３．５氟甲砜霉素标准储备液称取一定量的氟甲砜霉素标准品，用甲醇溶解并定容至１０００μｇ／ｍＬ，置２℃～８℃冰箱保存，贮存期６个月。３．３．６氟甲砜霉素标准工作液吸取一定量的氟甲砜霉素标准储备液，用ｐＨ６．０磷酸盐缓冲液稀

7、释成０．０２μｇ／ｍＬ的标准工作液，应当日配制使用。４检验方法４．１方法提要将测试样品经缓冲液提取、温育和离心后，取上清液进行测定。利用抗生素对敏感菌的抑制作用来判别试样中是否含有甲砜霉素和氟甲砜霉素类抗生素。４．２试样制备和保存４．２．１试样制备肉、鱼和虾：从原始样品中取出部分有代表性样品，取２５０ｇ可食部分放入高速组织捣碎机均质，充分混匀，装入清洁容器内www.bzfxw.com，并标明标记。牛奶同批次直接从三个独立包装各取１００ｍＬ混合均匀。装入清洁容器内，并标明标记。测试样品制备操作过程

8、中应防止样品受到污染或发生残留物含量的变化。４．２．２试样保存肉、鱼、虾：试样于－１８℃以下保存，牛奶２℃～８℃保存。４．３菌悬液制备将藤黄微球菌ＡＴＣＣ９３４１菌种用普通营养肉汤培养基复活，接种血平板分离出单个菌落，挑取单个菌落接种纯化及传代培养基（ＴＳＡ）斜面，３７℃培养１８ｈ～２４ｈ。取斜面菌苔制成０．５麦氏单位菌悬液备用。４．４检定用藤黄微球菌犃犜犆犆９３４１平板制备无菌吸取０．５ｍＬ０．５麦氏单位藤黄微球菌悬液注入灭菌平皿内，加入８ｍＬ溶化后冷却至５０℃左右灭菌抗生素培养基１号（ＡＭＩ