蜂胶中β葡萄糖苷酶活性的测定

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1、蜂产品分析【2】宋心仿．蜜蜂产品的应用及检测加工技术【M】．北京：中国农业出版社，2000：l18，177，192，198【3】刘新迎．使用阿贝折射仪检测蜂蜜水分含量应注意的几个问题【J】．蜜蜂杂志，1999，(5)：27．蜂胶中p一葡萄糖苷酶活性的测定张翠平，陈璇，易松强，胡福良2(浙江大学动物科学学院，杭州310029)摘要：本文采用一种快速简便的方法首次在新鲜蜂胶中检测出B一葡萄糖苷酶。该法以对一硝基B—D一葡萄糖苷(pNPG)为底物进行酶解，用分光光度法测定水解后释放出来的对一硝基苯酚含量确定酶活性的强弱。对影响酶活性的参数进行了优化，最优条

2、件为：磷酸氢二钠一柠檬酸缓冲液的pH值为6．0，evpp力H人量为蜂胶量的20％，反应温度57℃，底物浓度30Mm，反应时间1．5～3．5ho研究结果还提示：B一葡萄糖苷酶活力的高低与蜂胶的新鲜度可能相关。关键词：蜂胶；p一葡萄糖苷酶；酶活性DeterminationofB-glucosidaseactivityinpropolisZhangCui-ping，ChenXuan，YiSong—qiang，HuFu—liang(CollegeofAnimalSciences，ZhejiangUniversity，Hangzhou310029)Abstra

3、ct：Amethodwasdescribedfortherapidandsimpleassayofg-glucosidaseactivityinpropolis．Itinvolvescolorimetricestimationofp—nitrophenolreleasedbyg-glucosidaseactivity．Anumberofparametersaffectingg-glucosidaseactivitywereevaluated，theoptimalconditionswerewhentheenzymeWasextractedwithas

4、uitableamountofPVPPis20％tothatofpropolisinphosphate—citratebuffer(pH6．O)withP--nitrophenyl-·13—·D·-glucosideat57oCfor30Mmsubstrateastheadditionlevelofpolyvinyp01ypyrt01idone(PVPP)as20％ofpropolis．ItWasalsosuggestedthattheenzymeactivitymaybeanindicatorforthefreshnessofpropolis．Ke

5、ywords：propolis，13-glucosidase，enzymeactivity蜂胶化学成分复杂，目前已从蜂胶中分离鉴定出的化学成分有黄酮类、萜烯类、醌类、酯类、醇类、醛类、酚类、有机酸类，还有大量的氨基酸、酶类、维生素类、多糖及多种微量元素等。尤其是含有大量的类黄酮、萜烯类化合物是蜂胶的重要特基金项目：公益性行业(农业)科研专项(nyhyzx07—041o作者简介：张翠平(1980-)，女，博士研究生。{通讯作者：胡福良(1964．)，男，博士，教授。Tel：0571．86971952，E．mail：flhu@zju．edu．cn159蜂

6、产品分析征u’。黄酮类化合物是植物中最丰富的一类多酚类化合物，天然存在的黄酮类化合物多以糖苷形式存在。例如，黄酮醇类多为3—0一糖苷，也有的为7一。一糖苷和4’一。一糖苷他1，而黄酮和二氢黄酮及异黄酮类多为7—0一糖苷1310但是，蜂胶中已分离鉴定出的黄酮类化合物大都以游离黄酮苷元形式存在。因此，推测蜜蜂在采集蜂胶的过程中加入了自身分泌物，使黄酮苷水解成黄酮苷元141o天然存在的黄酮苷基本上都是p—D一葡萄糖苷，因此，蜜蜂很可能在采集蜂胶的过程中加入了B—D一葡萄糖苷酶。但迄今为止，还没有蜂胶中B—D一葡萄糖苷酶研究的相关报道，为了证实该酶的存在，有

7、必要建立蜂胶中p—D一葡萄糖苷酶提取检测的方法。B一葡萄糖苷酶，又称B—D一葡萄糖苷水解酶，别名龙胆二糖酶、纤维二糖酶和苦杏仁苷酶，属于水解酶类。它可催化水解结合于末端非还原性的p—D一糖苷键，同时释放出配基与葡萄糖体临10p一葡萄糖苷酶广泛存在于自然界中，可来源于植物、微生物，也可来源于动物161。Gilliametal(1988)在西方蜜蜂的中肠和后肠中发现p一葡萄糖苷酶¨10Pontohetal(2002)从西方蜜蜂的消化道、蜜囊、咽下腺中均分离纯化出B一葡萄糖苷酶，而且分离出的酶是相同的‘810因此，他们推断p一葡萄糖苷酶产生于蜜蜂的咽下腺，

8、在蜜蜂取食时分泌到口器里，传递到蜜囊中，然后再转移到巢房和消化道中。在蜂蜜中已发现B一葡萄糖苷酶的活性拇1，