蜂胶中9种酚类化合物的高效液相色谱分析

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1、2007年全国蜂产品信息交流会暨中国(桂林)蜂业博览会论文2007·03蜂胶中9种酚类化合物的高效液相色谱分析曹炜1，符军放l屈长会2，雷兴生2杨万锁2(1．西北大学蜂产品研究中心／陕西省蜂产品工程技术研究中心，西安710069；2．陕西老蜂农蜂业有限责任公司，西安710016)摘要：建立了测定蜂胶中9种酚类物质含量的反相高效液相色谱法。色谱条件：色谱柱为ZorbaxSB-C协(150minX4．6mm，5．0脚)，流动相为甲醇一O．1％甲酸，梯度洗脱，柱温为30℃，流速为1．OmL／min，检测波长为280、320和360nm。该方法准确、稳定、重现性好、加样回收率高。用此方法测定

2、了我国不同产地蜂胶样品中9种酚类物质的含量。结果表明：不同产地蜂胶样品中9种酚类物质含量存在差别，极性较大的酚酸类化合物的含量差异较大。关键词：蜂胶，高效液相色谱，黄酮类化合物，酚酸蜂胶是蜜蜂从植物的叶芽与树皮上采集的树脂，由蜜蜂混入蜂蜡和上颚腺分泌物形成的胶状物质。药理研究表明：蜂胶具有抗细菌、消炎、提高机体免疫力、抗癌以及抗氧化等多种生物功能【l】，因此，蜂胶在保健食品和医药行业中得到广泛的应用。已知蜂胶中含有150多种化合物【2】，其中具有生物活性的物质包括：酚酸类化合物、黄酮类化合物以及它们的衍生物，这些物质含量的高低将直接影响到蜂胶产品的保健功能和内在质量。中国虽然是世界蜂

3、胶生产大国，但是对蜂胶活性成分的研究较少，尤其缺乏对其中生物活性成分定量分析方法学的研究。本文采用高效液相色谱一二极管阵列检测器串联法，研究了中国蜂胶中酚类化合物的定量分析方法，同时测定了不同产地蜂胶样品中9种酚类化合物的含量。该研究结果对蜂胶产品的质量控制和蜂胶原料的标准制定均有重要的参考价值。1材料与方法1．1仪器和试剂1．1．1仪器HPl100高效液相色谱仪(美国Agilent公司)，包括四元梯度泵(G13llA)、二极管阵列检测器(G1315A)；Milli2QG超纯水制备仪(美[]Millipore公司)。1．1．2试剂甲醇为色谱纯，水为超纯水，甲酸为分析纯。咖啡酸、p．香

4、豆酸、反式阿魏酸、肉桂酸、生松素和白杨素购自Sigma公司；山奈酚、’芹菜素和高良姜素购自陕西慧科植物开发有限公司，含量>95％。蜂胶样品分别采自陕西、河南、湖北、辽宁、贵州、山东、河北、浙江和甘肃等9个省份，每个省份采集5个蜂胶样品，并按照SB／T10096．1992蜂胶标准进行鉴定。基金项目：陕西省科技攻关(2004k03．G8)；和西北大学2004年度重点科研基地开放基金资助项日(2004．29)作者简介：曹炜(1969-)，副教授，博士后，主要从事蜂产和功能食品的研究与开发。E—mail：caowei@nwu．edu．cn。联系电话：13572875671。682007年全国

5、蜂产品信息交流会暨中国(桂林)蜂业博览会论文2007·032．2实验方法2．2．1蜂胶样品的处理方法将采集到的蜂胶样品在．18。C冰箱中冷冻5h，然后用植物样品粉碎机粉碎至40目。取粉碎后的蜂胶样品5g，用50mL95％乙醇在常温下提取12h，滤纸过滤提取液，残渣再用50mL95％乙醇在常温下提取6h，合并2次提取液，8000rpm离心10min。取上清液在40。C下减压回收乙醇，残渣在真空干燥箱中干燥，蒸发除去水分得蜂胶浸膏。称取50mg浸膏，用甲醇溶解并定容至10mL，经0．45gm微膜过滤，移取10止滤液用于色谱分析。1．2．2对照品溶液的配置称取咖啡酸、p．香豆酸、反式阿魏酸

6、、肉桂酸、生松素、白杨素、山奈酚、芹菜素和高良姜素对照品适量，用甲醇溶解并定容，摇匀，配得咖啡酸、p．香豆酸、反式阿魏酸、肉桂酸、生松素、白杨素、山奈酚、芹菜素和高良姜素质量浓度分别为0．052，0．051，0．056，O．065，0．12，0．15，O．13，0．16和0．12g／L的对照品溶液，作为储备液。其他不同浓度的各对照品溶液由各自的储备液经甲醇稀释得到。2．2．3色谱条件ZorbaxSB．C18色谱柱(150nllllx4．6rnlTl，5．0gm)柱温为30℃；流动相为甲醇．0．1％甲酸，梯度洗脱，其时间程序为0min一30min一60min一70min一75min一8

7、0min，甲醇含量25％一55％一80％一95％一95％一25％，流速1．0mL／mim二极管阵列检测波长为280、320和360nlTl，并进行190～400nn'l全波长扫描。3结果与讨论3．1样品提取溶剂的选择我们曾研究了不同溶剂对蜂胶黄酮类化合物提取率的影响，结果发现，用乙醇作为溶剂时，总黄酮的提取率最高【3】。本文进一步考察了不同乙醇浓度对咖啡酸、P．香豆酸、反式阿魏酸、肉桂酸、芹菜素、生松素、白杨素山奈酚和高良姜素提取率的影响，发现95％的乙醇