灵芝多糖的含量测定方法探讨及改进

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1、陕西中医学院学报2009年09月第32卷第5期·62·JournalofShaanxiCollegeofTraditionalChineseMedicineSep．2009Vo1．!墨灵芝多糖的含量测定方法探讨及改进杨瑞瑞李国华樊宝娟(1．陕西省食品药品检验所，陕西西安710061；2．陕西省人民医院，陕西西安710100)摘要：为改进灵芝多糖含量测定方法，通过考察配制硫酸蒽酮溶液时硫酸的浓度，确定合理的反应条件，使反应系统自行升温，用紫外一可见分光光度法测定。改进后的灵芝多糖含量测定方法操作简单，结果可靠。

2、关键词：灵芝多糖；蒽酮；紫外一可见分光光度法；含量测定中图分类号：R284．1文献标识码：A文章编号：1002—168X(2009)05—0O62—02灵芝收载于《中国药典}2005年版一部⋯，在热前，从8O％到98％浓度反应程度逐渐加强，我国已有千年的药用历史，具有抗肿瘤、免疫调节、80％硫酸配制的蒽酮溶液反应后溶液稍有发热，降血糖、抗衰老等广泛药理活性。在对灵芝多糖的颜色为淡黄色，98％硫酸配制的蒽酮溶液反应后含量测定过程中，发现按《中国药典)2005年版一溶液产热剧烈，溶液颜色为淡绿色。原标准中显色部灵

3、芝多糖含量测定方法中规定的硫酸蒽酮溶液后在625nm测定亦为淡绿色，因此比较了不同浓配制方法配制的硫酸蒽酮溶液为一混浊液，几乎无度硫酸配制的葸酮溶液在水浴加热和不加热情况法显色测定，试验偏差很大，故本文进行了探讨及下与葡萄糖的反应情况。改进。2．2加热条件对测定的影响按标准中方法，取1仪器及试剂对照品溶液0．5mL，90％硫酸蒽酮溶液水浴加热岛津UV一2100型可见一紫外分光光度计；蒽显色后测定吸收度；另取对照品溶液0．5mL，加酮(分析纯，国药集团化学试剂有限公司生产)；硫98％硫酸蒽酮溶液显色5min，立

4、即在冰水中冷却酸(分析纯，西安化学试剂厂生产)；无水葡萄糖对照品(批号110833—200302，中国药品生物制品检5min，测定吸收度值，结果见表2。定所提供)；灵芝为市售药材。表2加热条件对测定的影响2实验方法显色剂90％硫酸蒽酮溶液水浴加热98％硫酸蒽酮溶液按《中国药典》一部灵芝多糖含量测定方法中规定的硫酸蒽酮溶液配制方法(精密称取蒽酮0．1g，加80％的硫酸溶液100mL使溶解，摇匀)配制的硫酸蒽酮溶液实际为一混浊液，无法显色测由以上结果可以看出，98％硫酸蒽酮溶液与定。改为按硫酸体积比配制硫酸蒽酮溶

5、液，蒽酮的葡萄糖的反应，利用浓硫酸与水反应产生的热量，溶解性明显改善，但显色后空白溶液、对照品溶液、足以使反应完全，省去了水浴加热的繁琐，使实验样品溶液均仍有不同程度的混浊，因此，对硫酸蒽更简化。酮的配制方法进行了优化。2．3反应时间对吸收度值影响的考察取对照品2．1硫酸浓度的优化取浓硫酸，按体积比分别溶液0．5mL，加98％硫酸蒽酮溶液，分别进行配制80％、85％、90％、95％、98％的硫酸溶液，精1min、2min、5min、10min、15min的显色反应，立密称取蒽酮0．1g，分别用不同浓度的硫酸溶

6、液即在冰水中冷却5min，测定吸收度值，结果显色反100mL使溶解，摇匀。按标准中方法，取对照品溶应2—15min吸收度值无明显变化，故确定反应时液0．5mL，显色后测定吸收度，每份同时做空白，间为5min。冰水浴中冷却2rain即可，考虑到做标结果见表1。表1不同硫酸浓度对蒽酮的溶解情况准曲线及样品时的方便，冷却时间亦确定为5rain(表3及图1)。表3反应时间对吸收度值的影响结果时闻(min)1251015吸收度O．2860．3l3O．3l5O．3l40．3l5对照品溶液中加入不同浓度蒽酮溶液后，未加20

7、09年o9月第32卷第5期陕西中医学院学报Sep．2009Vo1．32No．5J0umalofShaanxiCoUegeofTraditionalChineseMedicine·63·OO0OOOOOOO0绘制标准曲线。弘∞∞叭∞3655553．3供试品溶液的制备取样品粉末2g，精密称定，置索氏提取器中，加水90mL，加热回流提取至提取液无色，提取液转移至100mL量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀，精密量取10mL，加入乙醇150mL，摇匀，4℃放置12h，取出。离心，倾去上清液，沉淀加水溶解并转移至50mL量瓶

8、中，加水稀释到刻度，摇匀，作为供试品溶液。3．4测定方法精密量取供试品溶液2mL，置时间(分钟)10mL具塞试管中，照标准曲线制备项下的方法，自图1反应时间对吸收度值的关系“精密加入硫酸蒽酮溶液6mL”起，依法测定吸光2．4测定时间对吸收度值的影响取对照品溶液度，从标准曲线上读出含葡萄糖的重量(mg)，计O．5mL，加98％硫酸蒽酮溶液，摇匀，反应5min，算，即得。立即在冰水中冷却5min，分别在