灵芝多糖提取及性质分析

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1、北方园艺2011(06)：43～45·研究简报·灵芝多糖提取及性质分析郑静，韩宏义，常乃涛，白鹏(丹东农科院，辽宁凤城118100)摘要：从赤灵芝子实体原粉中分离提纯得到2种均一多糖GLP1—1和GLP2—2，并应用HPLC、SephadexG-100凝胶层析、IR、UV等方法对分离得到的2种多糖进行纯度鉴别、组分测定及结构分析。结果表明：多糖GLP1—1是由木糖、【)I半乳糖、I)_葡萄糖、鼠李糖组成，UV光谱和IR光谱显示GLP1—1和GLP2—2均有多糖的特征吸收，并且具有吡喃多糖糖基的特征吸收峰；推断GI1-1和GLP2—2为吡喃杂多糖。关键词：赤灵芝；活性多糖；构效关系；纯化；凝胶层

2、析中图分类号：S567．31文献标识码：B文章编号：1001-0009(2011)O6一OO43—03赤灵芝(Ganodermalucidum)属担子菌纲(Basidio—其浓缩至500mL，5000r／min离心2Omin，收集沉淀，沉mycetes)多孔菌科(Polyparaceae)灵芝属(Ganoderma)的淀再依次用无水乙醇和乙醚离心洗涤，最后加沉淀置于一种药、食两用高等真菌l_】]，别名红芝、木灵芝。研究证真空干燥器抽真空干燥。明，灵芝含有多糖、氨基酸、蛋白质、多肽、甾类、萜类、有1．2．2总糖的测定采用苯酚一硫酸法l_2]。机酸挥发油、油脂、生物碱、链烷烃以及多种酶和无机离1．

3、2．3粗多糖的脱蛋白采用Sevage法脱蛋白。子等。其中灵芝多糖是灵芝中最有效的成分之一，与灵1．2．4分级沉淀在粗多糖溶液中边搅拌边滴加冷无芝的多种药理滑有关，因此也特别受到医药科技工作水乙醇。至体积比为1：3，即乙醇的终浓度为66，置者的重视，研究报导也最多。试验采用水提、乙醇分级4~C冰箱中沉淀过夜，5000r／rain离心2Omin，分别收集沉淀的方法得到了2个粗多糖级分，进一步用DEAE-纤沉淀和上清液，然后将沉淀冷冻干燥的66级份维素和凝胶渗透色谱反复层析，得到了2种均一多糖(GLP1)，在上清液中加入冷无水乙醇至1：3(乙醇终浓GLP1—1、GLP2—2，并通过多种化学方法及光谱

4、方法对各度为75)得到75级份(GLP2)。纯化多糖的化学结构及糖链构象进行了初步鉴定。1．2．5离子交换柱层析提纯装柱：将样品装上处理好的DEAE-纤维素层析柱中，以双蒸馏水为洗脱，分布收1材料与方法集，洗脱速度为24mL／h。苯酚一硫酸法检测。1．1试验材料1．2．6分离型凝胶柱层析提纯将样品装上处理好的赤灵芝，购于沈阳于宏区灵芝栽培基地。葡聚糖凝胶SephadexCrlO0层析，用双蒸馏水洗脱，用部1．2试验方法分收集器收集，每管／4min(约2～3mL／管)，收集约1～1．2．1灵芝子实体多糖的分离纯化灵芝子实体粉的30管。用苯酚硫酸法测各管多糖含量，合并洗脱峰各管脱脂：称取灵芝子实体

5、粉200g，加入氯仿：甲醇(体积比洗脱液，旋转蒸发浓缩后，冷冻干燥精制多糖粉末2：1)混和液600H，置于45℃恒温水浴，冷凝回流6h。GLP1—1。GLP2按上述步骤纯化得到GLP2-2。如此回流脱脂3次，滤出溶剂，滤渣置烘箱中4O℃烘干。1．2．7灵芝多糖的单糖组成及其百分比测定高效液灵芝子实体粉的脱低聚糖：将经过脱脂的灵芝子实体相法：Sugar-pakTM(4．6×250mm)氨基柱；对照样：I)_粉，按料液比1：3加入80乙醇600mL，85℃回流6h，葡萄糖、I)_半乳糖、木糖、I)I果糖、核糖、鼠李糖、I)I甘露滤出溶剂，如此重复3次，将滤渣烘干保存，作为以下多糖；动相：乙腈：水：

6、75：15(V：V)；流速：1．0mlJmin；糖提取试验的原料。灵芝粗多糖的提取：将所得滤渣中进样量：20肚I。加入蒸馏水1000mL，95~100~C提取6h，过滤出溶液，1．2．8紫外扫描将粗灵芝多糖经DEA纤维素纯化浸提4～5次，合并滤液，然后用旋转蒸发仪，于40~C将所得到的纯品用双蒸馏水溶解后，用紫外光谱仪在190~400nnl的波长下进行紫外扫描，测定其最大吸第一作者简介：郑静(1976一)，女，辽宁丹东人，硕士，研究方向为生收峰。物技术。E-mail：fczj8824@163．COnl。1．2．9红外光谱测定[3溴化钾压片法，分别取少量收稿日期：2011-01-07经Sepha

7、dexG-100纯化后所得的精多糖，分别置于玛瑙43·研究简报·北方园艺2011(06)：43～45研钵中，再加入适量溴化甲粉末载体，研磨后放入压片模具中加压400kg，3rain后取出样片放入仪器的样品槽中进行测试。＼2结果与分析螫2．1灵芝子实体多糖的分离纯化2．1．1离子交换柱层析及所得GLP1、GLP2的凝胶层析GLP66经过离子交换柱层析，用双蒸馏水进行洗脱。洗脱速度为60mL／h，收集