灵芝多糖降血糖的机理探讨

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1、维普资讯http://www.cqvip.com137的丹于量差别较大，奎性电滹时比较容易产生双带现象，井且单随机引物扩增也会给差异条带的筛选、鉴定带来很大的干扰而本粪验中其对锚定引物进行荧光标记．扫描时只有古有错定I物的DNA链才能被检测出来，完全避免上述的阿题．太大降低了假阳性的发生率3．5电泳系统：常规的DD-PCR回收的差异条带有时并不是由单一片段昕柯成，而是包含有好几条不同的eDNA片段，这也正是DDRT假阳性卓较高的重要原因之一。这种情况在电泳距离短、条带分离不完全时比较容易出现。另外各条带之问距离太近的话．在回收差异条带时，很容易附带把】l缶近的非差异切割下来．从而

2、产生假阚畦。本实验采用强s重扩增琼瞒慵箍瞳电泳BECKMAN公司提供的Ge~myxlRDNAqnce进行电Lane1、ne2：分别为s1与s2重扩增的条带泳(玻璃板的大小33cm×66cm)t电泳4小时，分离完全．Lane3~5：分蜀Il为随机剖取的男外3个片段重扩埔的悄备条带间距离较大．回收容品．脂檐凝腔电泳显示为单一条带：实验中十回收片段重扩增后电泳皆显示为单一条带(如纯的总RNA再次纯化时．总RNA损失较多，有时会选到图5)．表明电泳分离效果良好{0，一些稀有mRNA的损失更太。而且我们在实验中发现．I，一3456总之．成功的DD-PCR取决于诸多条件．如提取的总经DNas

3、el处理后的总RNA再柞DD-Pt'R耐，电泳的条带RNA的质量反转录、扩增的效率．电泳系统的分辨能力等明显减少硪弱(如图j)故权衡利弊在DD·PCR操作过程中因素．我们对有关影响因素进行了优化，结果表明我们建立的还是以不用DNase【处理为好：荧光差异显示方法简便、晁敏、高效．完全适月l于一般性的基3．2eDNA反转录条件的改进：常规的DDPCR所得的片段因差异表达研究。～偏短．多分布于300hp附近．主要是由于这些实验中反转录温度较低(通常在38(到42(之间)不划于RNA攘扳二缎参考文献结构的解开．从而使台成的第一链cDNA偏短l针对这一缺陷，本实验中把反转录温度提高判50

4、(’．以利于长片段cDNA的合成相应模板扩增所得的cDNA片段亦更长．多分布于300～800bp之间．长cDNA片段可提供更多的序列信息．以利于后续的分析工作，3．3引物的改进实验中应用的锚定引物在oligo—dT的上游增加了l7个碱基的T7启动子序列．使得锚定引物的长度达31个碱基随机引物在原有1O个碱基的基础上在5’端增加了16个碱基的M13通用反向序列．使得随机引物的长嚏达26个碱基，从而可以在高严谨退火温度f如60L’)下进行大部分循环．提高了扩增的特异性并且应甩T7、ML3为重扩增引物，亦硪少了嫂阳性的发生率3．4标记分子的改进：同位察标记容易造成环境污染和实验一者的身

5、体损害．用其标记的PCR产物，同一cDNA中两条链一灵芝多糖降血糖的机理探讨淅江医学高等专科学校(3l0053>张玲芝浙江托学医学院(310003)坞磊【摘要】目的观察灵芝多悖降血穗的雌用，探讨它障血糖的可照机理；方法应用药特建立括最病大鼠模型、分蛆并培予不荆量曲灵芝多特，观摩血塘、艄岛素、葡萄格激酶等指标。结果是芝步话掩显著降俄血耱，增加臃岛素曲舟泌．修复脯岛细胞，增加葡萄糖擞酶的活性．结论口蔗是芝多糖可垮循糖屎精大鼠曲高血糖、升高腱岛素采平．可能是递进灵芝多糖对胰母鳍胞的车同程度的侉复；灵芝多糖可促进齄屎崭大鼠体内帕葡萄着磷藏化。本研究课题由浙江省教育厅辩基金辩助维普资讯ht

6、tp://www.cqvip.com138福建医药杂志2004年第26卷第3期【关键词】灵芝多糖；糖尿病；胰岛素；葡萄糖激酶；肝糖原【中圈分类号】R962【文献标识码】B【文章编号】1002—2600(2004)03—0137—04ResearcherjngthemechanismofGLP'shypoglycemZhangLingzhi．FengLei．ZhengJiangMedicalSchool，Hangzhou310053，China[Abstract]ObjectiveobservingthehypoglycemiceffectofGLP．anditsactionmec

7、hanismisalsopreliminaryexplored．MethodsestablishingtheSDratsmodelanddividedtheminto5groupsrandomlyandigdifferentdosewithGLP．measuringbloodsugar，insulin，liverglucokinase．1iverglucogen．ResultsGLPdecreasesbloodsugar，increasesinsulinsecretion，rec