紫外可见分光光度法课件

《紫外可见分光光度法课件》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在教育资源-天天文库。

1、紫外－可见分光光度法原理、应用及有关注意事项第一节概述紫外－可见分光光度（UV－VIS)法是一种常用的检验方法，它是通过被测物质在紫外光区的特定波长或一定波长范围内的吸光度，对该物质进行定性和定量分析的方法。紫外光谱是物质在200～400nm的近紫外光区和400～850nm的可见光区的吸收光谱。通常使用的紫外－可见分光光度计的工作波长范围为190～900nm,本法在药品检验中主要用于药品的鉴别、检查和含量测定。适用于微量和痕量组分的分析，测定灵敏度可达到10-4～10-7g/ml或更低范围。第二节原理紫外分光光度法之所以能成为一种

2、分析方法，主要依据两点：一、就是我们常说的吸收度，2005年版药典已将它改为吸光度，这样说可能更准确些。就是物质对光的吸收程度。我们首先说一下电磁波，所有电磁波在性质上都完全相同的，他们之间的区别仅在于波长或频率的不同。按照波长排列从短到长依次为r射线、x射线、紫外线、可见光、红外线、微波、无线电波等。电磁辐射源与物质作用时，会与物质间产生能量交换。按物质和辐射能的转换方向，光谱法可分为吸收光谱法和发射光谱法两大类。电磁辐射源照射试样时，其原子或分子选择吸收某些具有适宜能量的光子，使相应波长位置出现吸收线或吸收带，所构成的光谱为吸

3、收光谱。利用物质的吸收光谱进行定量、定性及结构分析的方法称为吸收光谱分析法。紫外－可见吸收光谱是一种分子吸收光谱，它是由于分子中原子的外层电子跃迁而产生的。因此，紫外吸收主要决定于分子的电子结构，故紫外光谱有称为电子光谱。在不同的波长下测定物质对光吸收的程度（吸光度），以波长为横坐标，以吸光度为纵坐标，所绘制的曲线称为吸收光谱，测定的波长范围在紫外－可见区，称紫外－可见光谱，简称紫外光谱。由上图可以看出吸收光谱的特征：⑴曲线上“A”处称最大吸收峰，它所对应的波长称最大吸收波长，以λmax表示。⑵曲线上“B”处有一谷，称最小吸收

4、，所对应的波长，称最小吸收波长，以λmin表示。⑶曲线上在最大吸收峰旁边有一小峰“C”，形状像肩的部位，称肩峰，以λsh表示。⑷在吸收曲线的波长最短的一端，曲线上“D”处，吸收相当强，但不成峰形，此处称为末端吸收。二、Beer-lambere定律，它是描述物质对单色光吸收强弱与吸光物质的厚度和浓度间关系的定律。数学表达式为A=ELCA为吸光度，吸光度与浓度或厚度之间是正比关系，其中E是比例常数，称为吸光系数。正是由于Beer-lambere定律的发现，吸光度才与物质的浓度联系起来，紫外分光光度法才应用于物质的测定。第三节　　应用

5、上面简单讲了紫外分光光度法的工作原理，下面系统讲一下紫外分光光度法的应用，主要讲一下它在药品检验中各种用途。某些物质的吸收光谱上可出现几个吸收峰，不同的物质有不同的吸收峰。同一物质的吸收光谱有相同的λmax，λmin，λsh；而且同一物质相同溶度的吸收曲线应相互重合。这句话揭示了紫外分光光度法的应用依据。应用主要分四个方面：第一：药品的定性鉴别定性鉴别具体又分三个方法比较光谱一致性吸收光谱中，λmax、λmin、肩峰以及整个吸收光谱的形状决定于物质的性质，其特征随物质的结构而异，所以是物质定性的依据。测定某物质的紫外吸收光谱的曲线

6、，可与已知标准的紫外光谱图相对照。（对照时须注意测定的条件，如溶剂、浓度等。溶剂可能会影响整个光谱的形状，比如多潘立酮片紫外鉴别时用开封的异丙醇所分析的光谱形状就与天津的试剂不一致。）采用紫外光谱进行定性鉴别有一定的局限性，由于化合物紫外吸收峰较少，而且峰形都很宽，不象红外光谱是许多指纹峰，在成千上万种有机化合物中，不同的化合物可有相似的吸收光谱，所以在用紫外吸收光谱进行化合物定性鉴定时，应注意：化合物相同，其紫外光谱应完全相同；但是紫外光谱相同不一定化合物就相同，可能仅是存在某些相同的发色团或基团，为进一步确证，可换一种溶剂或采

7、用不同酸碱性的溶剂，再分别把对照品和样品配成溶液测定光谱作比较。如果两种纯化合物的紫外光谱明显差别时，则可以肯定两种化合物不是同一物质。对比吸收光谱特征数据的一致性最常用于鉴别的光谱特征数据有吸收峰（λmax）和峰值吸光系数（εmax或E1%1cm），这是因为峰值吸光系数大，测定灵敏度较高，且吸收峰处与相邻的波长处吸光系数值的变化较小，测量吸光度时受波长变动影响较小，可减少误差。不只1个吸收峰的化合物，可同时用几个峰值做鉴别依据。（如药检所去年以来检的创可贴，就是在257nm、262nm、269nm三个波长处测定最大吸收，规定三

8、个波长处都应有最大吸收，没有最大吸收就可以判定为假药）。肩峰或吸收谷处的吸光度测定受波长变动影响也较小，有时也可用谷值、肩峰值与峰值同时作鉴别依据。（比如甲硝唑片的第三个鉴别就是分别在277nm和241nm的波长处分别测最大吸收和最小吸收。）具有不