复制（21） ppt课件

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1、一、DNA的复制内容提要：●DNA的半保留复制●与DNA复制有关的物质●DNA的复制过程(大肠杆菌为例)●DNA复制的其它方式●真核生物中DNA的复制特点1、定义：由亲代DNA生成子代DNA时，每个新形成的子代DNA中，一条链来自亲代DNA，而另一条链则是新合成的，这种复制方式称半保留复制。（一）DNA的半保留复制（semi-conservativereplication）DNA复制模式假说思考题中国科学院上海生化与细胞所2002年招收硕士研究生分子遗传学入学考试：请设计一个实验来证明DNA复制是以半保留方式进行的（8分）。2、实验证据（1958Meselson和S

2、tahl）：MatthewMesselsonFranklinStahl“Heavy”DNA“Hybrid”DNA“light”DNA“Hybrid”DNA3、DNA半保留复制的生物学意义：DNA的半保留复制表明DNA在代谢上的稳定性，保证亲代的遗传信息稳定地传递给后代。（二）与DNA复制有关的物质1、原料：四种脱氧核苷三磷酸（dATP、dGTP、dCTP、dTTP)2、模板：以DNA的两条链为模板链，合成子代DNA3、引物：DNA的合成需要一段RNA链作为引物4、引物合成酶（引发酶）：以DNA为模板合成一段RNA,这段RNA作为合成DNA的引物(Primer)。实质

3、是以DNA为模板的RNA聚合酶。5、DNA聚合酶:以DNA为模板的DNA合成酶●以四种脱氧核苷酸三磷酸为底物●反应需要有模板的指导●反应需要有3-OH存在●DNA链的合成方向为53性质聚合酶Ⅰ聚合酶Ⅱ聚合酶Ⅲ3'5'外切活性+++5'3'外切活性+--5'3'聚合活性+中+很低+很高新生链合成--+Ⅰ:主要是对DNA损伤的修复；以及在DNA复制时切除RNA引物并填补其留下的空隙。Ⅱ：修复紫外光引起的DNA损伤Ⅲ：DNA复制的主要聚合酶，还具有3’-5’外切酶的校对功能，提高DNA复制的保真性原核生物中的DNA聚合酶(大肠杆菌）αβγδε定位细胞核细胞核线粒体

4、细胞核细胞核3’-5’外切--+++酶活性功能引物合成修复作用线粒体DNA的复制核DNA的复制？真核生物中的DNA聚合酶6、DNA连接酶（1967年发现）：若双链DNA中一条链有切口，一端是3’-OH，另一端是5‘-磷酸基，连接酶可催化这两端形成磷酸二酯键，而使切口连接。但是它不能将两条游离的DNA单链连接起来DNA连接酶在DNA复制、损伤修复、重组等过程中起重要作用3‘5‘3‘5‘OHP7、DNA拓扑异构酶(DNATopisomerase)：拓扑异构酶І：使DNA一条链发生断裂和再连接，作用是松解负超螺旋。主要集中在活性转录区，同转录有关。例：大肠杆菌中的ε蛋白

5、拓扑异构酶Π：该酶能暂时性地切断和重新连接双链DNA，作用是将负超螺旋引入DNA分子。同复制有关。例：大肠杆菌中的DNA旋转酶上海生化所1998年分子遗传学试题：拓扑异构酶通过水解ATP获得能量来解开双链DNA。E.coli中的rep蛋白就是解螺旋酶，还有解螺旋酶I、II、III。rep蛋白沿3’5’移动，而解螺旋酶I、II、III沿5’3’移动,故推测它们协同以结合在母链分子上以解开双链结构。8、DNA解螺旋酶/解链酶(DNAhelicase)9、单链结合蛋白(SSBP,single-strandbindingprotein)：稳定已被解开的DNA单链，阻止复

6、性和保护单链不被核酸酶降解。（三）DNA复制过程（大肠杆菌为例）双链的解开RNA引物的合成DNA链的延伸切除RNA引物，填补缺口，连接相邻的DNA片段1、双链的解开DNA的复制有特定的起始位点，叫做复制原点。ori(或o）、富含A、T的区段。基本概念：上海生化所1998年分子遗传学试题：真核生物复制起始点的特征包括（）A富含GC区B富含AT区CZ-DNAD无明显特征从复制原点到终点，组成一个复制单位，叫复制子复制时，解链酶等先将DNA的一段双链解开，形成复制点，这个复制点的形状象一个叉子，故称为复制叉复制叉复制叉复制方向和速度：单起点、双向等速多起点、双向等速双链解

7、开、复制起始大约20个DnaA蛋白在ATP的作用下与oriC处的4个9bp保守序列相结合在HU蛋白和ATP的共同作用下,DnaA复制起始复合物使3个13bp直接重复序列变性,形成开链DnaB解链酶六体分别与单链DNA相结合(需DnaC帮助),进一步解开DNA双链2、RNA引物的合成DnaB蛋白活化引物合成酶，引发RNA引物的合成。引物长度约为几个至10个核苷酸，基因组DNA复制时，先导链的引物是DNA，后随链的引物是RNA(-)2002年上海生化与细胞所DNA的半不连续复制（semi-discontinuousreplication)DNA复制时其中一条子链的合