细胞培养基本知识

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1、细胞培养基本知识根据《中华人民共和国传染病防治法实施办法》规定：凡从事致病性微生物实验的科研、教学和生产单位，作为各类传染病菌（毒）研究操作的基本单元，实验室必须有防止致病性微生物扩散的制度和人体防护措施。不同危害群的微生物必须在不同的物理性防护的条件下进行操作，一方面防止实验人员和其他物品受到污染，同时也防止其释放到环境中。传染病原危害等级。第一级危害群微生物：与人类成人健康和疾病无关；（无或极低的个体和群体危险）不太可能引起人或动物致病的微生物第二级危害群微生物：在人类所引起的疾病很少是严重的，而且通常有预防及治疗的方法；（个体危险中等，群体危险低）实验室暴露也许会引

2、起严重感染，但对感染有有效的预防和治疗措施，并且疾病传播的危险有限。第三级危害群微生物：在人类可以引起严重或致死的疾病，可能有预防和治疗的方法；第四级危害群微生物：在人类可以引起严重或致死的疾病，通常无预防和治疗的方法，如炭疽杆菌、霍乱弧菌、埃博拉病毒、天花病毒等。隔离的设备、实验室的设计及实验实施等3个方面所组成.根据其密封程度的不同，分为P1、P2、P3和P4四个生物安全等级。P是英文protect（保护）的缩写。四级生物安全（P4）是生物安全实验室等级最高的实验室，可以有效阻止传染性病原释放到环境中，同时给研究人员提供生物安全的保证。实验室可分：基础实验室——一级生

3、物安全水平、基础实验室——二级生物安全水平、防护实验室——三级生物安全水平最高防护实验室——四级生物安全水平。根据操作不同危险度，等级微生物所需的实验室设计特点、建筑构造、防护设施、仪器、操作以及操作程序来决定实验室的生物安全水平。有关的手册有叙述：与不同危险度等级相对应的（而非“等同的”）各危险度等级微生物所要求的实验室生物安全水平。生物安全实验室（P1、P2、P3、P4）1级基础实验室——一级生物安全水平基础的教学、研究,GMT不需要；开放实验台2级 基础实验室——二级生物安全水平初级卫生服务；诊断、研究GMT加防护服、生物危害标志开放实验台，此外需BSC用于防护可能

4、生成的气溶胶3级 防护实验室——三级生物安全水平特殊的诊断、研究，在二级生物安全防护水平上增加特殊防护服、进入制度、定向气流BSC和／或其他所有实验室工作所需要的基本设备4级 最高防护实验室——四级生物安全水平危险病原体研究在三级生物安全防护水平上增加气锁入口、出口淋浴、污染物品的特殊处理Ⅲ级BSC或Ⅱ级BSC。穿着正压服、双开门高压灭菌器（穿过墙体）、经过滤的空气。BSC：生物安全柜；GMT：微生物学操作技术规范我国在生物安全方面也制定过一些相应的条例和法规。中华人民共和国卫生行业标准（WS233－2002）《微生物生物医学实验室生物安全通用准则》中对生物安全三级（P

5、3）实验室进行了规定。每个实验室都应该采用“安全手册”或“操作手册”，其中定义了已知的和潜在的危害，并规定了特殊的操作程序来避免或尽量减小这种危害。规范的微生物学操作技术是实验室安全的基础，而专门的实验设备仅仅是一种补充，绝不能替代正确的操作规范。在一级生物安全水平操作的微生物不太可能引起人类疾病或兽医学意义的动物疾病。但理想的做法是，所有实验室工作人员应进行上岗前的体检，并记录其病史。疾病和实验室意外事故应迅速报告，所有工作人员都应意识到应用规范的实验室操作技术的重要性。在二级生物安全水平操作微生物的实验室工作人员1、必须有录用前或上岗前的体检。记录个人病史，并进行一

6、次有目的的职业健康评估。2、实验室管理人员要保存工作人员的疾病和缺勤记录。3、育龄期妇女应知道某些微生物（如风疹病毒）的职业暴露对未出生孩子的危害。培训人为的失误和不规范的操作会影响所采取的安全措施对实验室人员的防护效果。因此，熟悉如何识别与控制实验室危害的、有安全意识的工作人员，是预防实验室感染、差错和事故的关键。管理者应确保将安全的实验室操作及程序融合到工作人员的基本培训中。所有实验室工作人员都会经常遇到的高危操作，包括：1、吸入危险（气溶胶产物），如使用接种环、划线接种琼脂平板、移液、制作涂片、打开培养物、采集血液／血清标本、离心等2、食入危险，如处理标本、涂片以及

7、培养物3、在使用注射器和针头时刺伤皮肤的危险4、处理动物时被咬伤、抓伤5、处理血液以及其他有潜在病理学危害的材料6、感染性材料的清除污染和处理。典型的二级生物安全水平实验室门保持关闭并贴上适当的危险标志。潜在被污染的废弃物同普通废弃物隔开。基本生物安全设备1、移液辅助器——避免用口吸的方式移液2、生物安全柜，在以下情况使用：——处理感染性物质；如果使用密封的安全离心杯，并在生物安全柜内装样、取样，则这类材料可在开放实验室离心——空气传播感染的危险增大时——进行极有可能产生气溶胶的操作时（包括离心、研磨、混匀、剧烈摇动、超声破碎