肾移植术后巨细胞病毒感染早期检测方法

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1、肾移植术后巨细胞病毒感染早期检测方法摘要】肾移植术后巨细胞病毒(CMV)感染具有较高的发病率和病死率，早期准确的检测有利于临床治疗，本文就CMV感染的检测方法尤其是感染早期的几种诊断方法进行阐述。【关键词】肾移植；巨细胞病毒；检测方法巨细胞病毒(CMV)感染是肾移植术后的常见并发症，据文献报道CMV活动性感染率在肾移植术患者中约50%～75%,有10%～30%的患者为有症状的CMV感染。一旦发生严重的CMV感染,特别是间质性肺炎,病死率高达25%［1］。在移植术后,随着各种免疫抑制剂的应用,病毒将被激活。在肾移植受体中,CMV感染的临床发病率与供体和受体移植前的血清学状态以及所用

2、免疫抑制剂的种类和剂量有关。受体CMV阳性R+/供体CMV阴性D，为继发性感染，症状较轻；如果由于供体肾及术后使用血液制品CMV阳性，即R/D+，为原发性感染,病情最为严重；若为重复感染,即R+/D+，病情较重［2］。有文献报道术前供、受体CMV血清反应均为阳性时,术后患者发生临床CMV感染的概率可达50%,供体阳性、受体阴性时术后CMV病的发生率近66%,因此而造成的CMV病、移植物丧失及医疗花费都比其他因素的大［3］。急行排斥反应和免疫抑制剂的使用是CMV感染最主要的诱发因素［4］,抗淋巴细胞球蛋白(ALG)，OKT3及细胞毒性药物能直接促使潜伏的病毒活化，而环孢素A、F

3、K06及糖皮质激素能够抑制机体的免疫系统,导致病毒感染的播散与迁延,进一步加重病情，其中多克隆或单克隆抗淋巴细胞抗体刺激CMV感染的效应最强,成为影响移植术后CMV感染发生的重要因素。因此早期诊断和及时预防性抗病毒治疗是降低移植术后CMV病发病率和病死率的关键。CMV感染的症状常表现为不明原因的发热，伴有白细胞减少或淋巴细胞增多、血小板减少、肌肉痛、关节痛和胃纳差等，当发展为CMV病时，常引起间质性肺炎，表现为干咳和呼吸困难，严重者可发生急性呼吸衰竭。此外，还可引起脑炎、肝炎、胃肠炎、急性视网膜炎、消化道溃疡等。　1CMV感染的检测方法一般检查外周血白细胞减少或淋巴细胞增多，血小

4、板减少；尿常规可发现蛋白尿，并有少量红细胞、白细胞，可有ALT和胆红素升高，肺部X线检查：双下肺炎症改变。组织学检查病毒分离培养，取尿、血、咽拭子、支气管肺泡灌洗液及组织标本直接培养，病毒培养敏感性低，耗时常需要3周～6周时间出结果，不利于指导临床用药。组织学检查找巨形细胞,一般在严重原发性感染时更有意义。血清学检查包括CMV抗体检查，CMV抗原血症测定法，CMV多聚酶链测定法和PP7mRNA的监测。现就血清学检查的具体方法介绍如下。CMV抗体检查采用ELISA法测定血清中CMVIgM、IgG。抗CMV抗体血清学检查方法简单，但CMVIgM在原发性感染早期不出现，CMVIg

5、G在继发性感染中需升高4倍才有意义。由于肾移植患者术后常规使用免疫抑制剂，CMV抗体产生常延迟或缺乏，影响阳性检出率。一般用于监测移植前供、患者的CMV携带状况。CMV抗原血症测定法机体感染CMV后可在外周血白细胞中检测到CMV抗原，成为CMV抗原血症,CMV抗原血症的出现明显早于临床症状的出现和血清学的改变。CMVPP5抗原检测可以早期诊断CMV感染，已成为国际公认的监测HCMV活动性感染的“标准方法”之一［6］。CMVPP5抗原是CMVUL3基因编码的早期即刻蛋白(IEA)，在CMVDNA复制前就有合成，对CMV的复制具有调控作用,是体内早期活动性CMV病毒复制的标志

6、［6，7］。CMV抗原血症测定法计数阳性细胞，根据已制定的参数标准来决定是否采取抗病毒治疗。通常通过免疫组织化学染色法(即标记链丝菌素生物素结合法，LSAB法)检测外周血白细胞CMV抗原，该方法可以避免用ABC法导致内源性过氧化物酶的非特异性染色而呈现假阳性的结果，而且用普通显微镜即可作出诊断。在普通光学显微镜下观察并计数5万个白细胞中CMV阳性细胞个数(称抗原指数)。阳性细胞在镜下细胞核为黄色或棕黄色，阴性细胞核为蓝色或蓝紫色。测定CMVPP5抗原敏感性及特异性均高，达90％以上，但是CMV抗原血症测定法的缺点是需要新鲜血标本(标本必须在h内及时处理),来获得最佳敏感性，否

7、则PP5阳性细胞数将会减少,试验的敏感性将会降低。CMV多聚酶链测定法用多聚酶链反应(PCR)来扩增DNA被证实是检查临床标本CMV感染的可靠方法。通常有定性PCR技术和定量PCR技术。定性PCR定性PCR主要检测外周血白细胞CMV的磷酸化蛋白PP1基因序列,要严格按照PCR诊断试剂盒操作说明书进行操作。根据文献报道，CMV激活性感染和潜伏性感染患者的单个核细胞中存在着低水平的CMVDNA，该方法不能区分CMV活动性感染和潜伏性感染,因此对于临床监测CMV感染有一定的局限性［8