基础医学微生物感染的病原学检查法课件

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1、MedicalMicrobiologyDepartmentofMicrobiology,HMU第一篇微生物学基础第8章微生物感染的病原学检查法微生物学教研室谷鸿喜提纲细菌感染的微生物学检查法病原体检查核酸的检测抗原、抗体的检测病毒感染的微生物学检查法电镜及免疫电镜病毒的分离培养和鉴定核酸的检测抗原、抗体的检测真菌感染的微生物学检查法直接镜检真菌的分离培养病原学实验室诊断方法形态学检查光学显微镜　　电子显微镜分离培养和鉴定免疫学技术抗原－抗体检测分子生物学方法病原体基因检测标本的采集与送检原则无菌操作感染部位、病变部位采集标本不同时间采集不同标本尽量在使用抗生素前采集检查特异性抗体，采急性期和

2、恢复期双份血清≥4倍有诊断价值。血清标本应-20℃保存及时送检多数细菌标本应冷藏送检。脑膜炎奈瑟菌、淋病奈瑟菌应注意保温，床旁接种病毒4℃~-70℃保存细菌感染的微生物学检查法细菌学诊断病原菌成分检测抗体的检测细菌学诊断示踪性检测形态学检查分离培养生化试验血清学鉴定致病力和药敏测定动物实验毒力检测药物敏感试验形态学检查细菌染色检查法革兰染色法（Gramstain）抗酸染色法（acid-faststain）荧光染色暗视野检查（darkfieldexamination）用于检查活菌、螺旋体及其动力直接涂片镜检形态与染色性具有特征的病原菌可直接染色镜检，根据典型形态、排列、染色性做初步诊断病原菌的

3、分离培养：菌落大小形态颜色表面性状透明度溶血性生化反应糖发酵试验H2S试验枸橼盐利用试验血清学鉴定利用含已知的特异性抗体的免疫血清，对细菌（志贺菌属、沙门菌属）进行群和型的鉴别常用方法是玻片凝集试验动物实验常用动物小鼠　　豚鼠　　家兔接种途径皮内　皮下　腹腔　静脉脑内　鼻腔　灌胃毒力检测半数致死量medianlethaldose，LD50半数感染量medianinfectivedose,ID50Elek平板白喉毒素肠产毒性大肠埃希菌肠毒素药物敏感试验Antimicrobialsusceptibilitytest方法纸碟法、试管法、小杯法和凹孔法最低抑菌浓度minimuminhibitoryc

4、oncentration，MIC能够抑制培养基内细菌生长的最低药物浓度最低杀菌浓度minimumbactericidalconcentration，MBC是指能够杀灭培养基内细菌的最低药物浓度。MIC和MBC的值越低，表示细菌对该药越敏感杀菌性药物的抑菌和杀菌浓度相等或相近，但抑菌性药物即使在很高的浓度下也无杀菌作用病原菌成分检测抗原的检测用已知的特异性抗体检测未知的细菌抗原成分方法有玻片凝集试验、协同凝集试验、间接血凝试验、乳胶凝集试验、对流免疫试验、酶免疫技术、免疫荧光技术和同位素标记技术等核酸的检测核酸杂交PCR病原菌抗原的检测利用已知的特异性Ab检测Ag的方法常用的方法有沉淀反应（p

5、recipitationtest）协同凝集试验（coagglutinationtest）免疫荧光法（immunoflorecence,IF）单克隆抗体技术（McAbtechnique）细菌核酸的检测基因探针DNA印迹杂交(southernblot)质粒指纹图谱分析PCRPCR基因芯片（microarraychip）血清学诊断：检测抗体用已知细菌或其Ag检测相应的Ab及量的多少，作为某些病原菌感染的辅助诊断急性期和恢复期双份血清，恢复期效价升高≥4倍有诊断价值局限难以早期诊断当抗体水平升高，很难找出抗体效价与病情间关系方法：玻片或试管凝集试验、沉淀试验、补体结合试验和冷凝集试验细菌感染的实验诊

6、断方法病毒感染的实验室诊断方法形态学检查分离培养病毒在细胞中增殖的鉴定指标病毒成分的检测病毒抗体的检测形态学检查电子显微镜（electromicroscopy，EM）免疫电镜法immunoelectromicroscopy，IEM光学显微镜包涵体（inclusionbody）内基小体（Negribody）病毒的分离培养动物接种鸡胚培养：9~14日鸡胚组织培养器官培养　　组织培养　　细胞培养细胞培养培养细胞的类型原代细胞Primarycellculture体外分裂2~3代二倍体细胞Diploidcell保持二倍染色体，50~100代，用于病毒疫苗生产传代细胞体外无限分裂的细胞，多是肿瘤细胞易于

7、传代，多数病毒敏感，但不能用于制备疫苗，且可能有内源性病毒病毒在细胞增殖的鉴定指标细胞病变效应（cytopathiceffect，CPE）红细胞吸附（hemadsorption）红细胞凝集（hemagglutination）病毒干扰作用（viralinterference）中和试验（neutralizationtest，NT）细胞病变效应（CPE）病毒的定量TCID50病毒感染性和毒力的指标是50%组织细胞感