生化期末设计性实验报告gpd缺乏症

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1、年级：2012级专业：麻醉学班级：麻醉班设计性实验报告第三实验室第四组时间：2013年6月11日星期一报告人：谢俊雄组员：计树雄、黎国燕、李玲、罗靖、王玺赟、王玉宣、谢俊雄、雍雪进、张茜、李俊案例分析案例分析案例：患儿，男性，3岁，因面色苍白伴血尿1天入院。1天前食用新鲜蚕豆后，今日出现恶心、呕吐、排尿呈酱油样（发生溶血性贫血）色，面色苍白。据家长反映，患者的姐姐也曾发生过类似情况。体格检查：体温38℃，脉搏150次/分，呼吸40次/分，血压80/60mmHg，呼吸急促，神清，萎靡，面色苍白，皮肤及巩c膜黄染，体型较同龄人瘦小。心、肺未及异常，

2、肝、脾未触及，双肾区无叩击痛，神经系统检查未及异常。实验室检查：红细胞1.98×1012/L，血红蛋白53g/L，血清总胆红素85.5µmol/L，结合胆红素13.7µmol/L，未结合胆红素71.8µmol/L，尿蛋白（++），潜血(+)，尿胆红素(－)，尿胆素原(+)，尿液镜下未见红细胞。红细胞1.98×1012/L（6.0-7.0）×1012/L↓血红蛋白53g/L（170-200)g/L↓血清总胆红素85.5µmol/L（3.4-17.1）µmol/L↑结合胆红素13.7µmol/L0～3.42μmol/L↑未结合胆红素71.8µmol

3、/L0～13.68μmol/L↑尿蛋白（++）潜血(+)尿胆红素(－)尿胆素原(+)实验室检查项目正常值患儿检查值案例分析皮肤及巩膜黄染黄疸发病前曾食用蚕豆其姐亦类似病史Bp：80/60mmHgP：150bpm呼吸：40每分排尿呈酱油样溶血性贫血T：38℃体温升高呼吸急促蚕豆病红细胞葡萄糖-6-磷酸脱氢酶缺乏症案例分析设计实验G6PD基因分析G6PD确诊试验红细胞G6PD活性测定G6PD荧光斑点试验G6PD筛选试验高铁血红蛋白还原试验特异性不高国际血液学标准化委员会(ICSH)推荐实验设计G6PD荧光斑点试验G6PD实验原理：葡萄糖-6-磷酸（

4、G6P）在G6PD作用下形成6-磷酸葡萄糖（6PGA）,同时使NADP转变为NADPH,后者在340nm波长紫外线照射下产生荧光。所以将含有G6P和NADP等的混合试剂与血混匀0分钟、5分钟、10分钟时分别取1滴血到滤纸上，通过观察滤纸上有荧光出现时间可判断G6PD活性。NADPNADPHG6P6PGA实验原理试剂—反应液：G6P液1份、NADP液1份、皂素2份、磷酸盐缓冲液3份和蒸馏水3份混匀仪器：长波紫外灯、滤纸、水浴箱G6PD荧光斑点试验取试管，加10μl全血+100μl反应液，混匀，取一滴于滤纸上（第一斑点）→作为对照将上液置于37℃水

5、浴10min，再取一小滴滴于滤纸上（第二斑点）→实验组晾干后，于长波紫外灯下（365nm）观察结果，计时根据结果作出相应诊断实验流程G6PD荧光斑点试验正常人：0min斑点无荧光，5-10min出现，10min荧光最强临床诊断：轻度缺陷者：0-10min荧光很弱或不出现中度缺陷者：10-30min出现荧光严重缺陷者：30min内不出现荧光结果分析G6PD荧光斑点试验红细胞G6PD活性测定实验原理：基本原理同G6PD荧光斑点实验。不同的是利用紫外光分光光度法定量测定酶活性，即每隔一分钟在340nm波长测定孵育液中NADPH吸光度（测6次），求每分

6、钟吸光度增加的平均值，根据单位时间内NADPH生成由于所用试剂及体系的不同。方法：①WHO推荐的Zinkham;②NBT定量法等实验原理G-6-PD活性测定的操作表（Zinkham法)试管对照管测定管NADP液（ml）0.10.1Tris液（ml）0.10.1氯化镁液（ml）0.10.1蒸馏水（ml）0.680.58G6P液（ml）—0.137℃预热溶血液（μl）2020立即340nm处测吸光度，以对照管调零，37℃恒温，每分钟观察1次，记录吸光度的变化实验流程红细胞G6PD活性测定计算公式：G-6-PD活性（U/gHb）=△A/min×100

7、0/6.22×1020/20×Hb(gL-1)△A/min:每min吸光度的平均变化值1000/6.22:为微摩尔消光系数1020/20:总容量与溶血液的量之比；实验流程红细胞G6PD活性测定G6PD缺陷者：G6PD活性较正常平均值低40%以上即可作出诊断方法正常值范围WHO推荐的Zinkham(12.01±2.09)IU/gHb(37℃)ICSH推荐的Glock与McLoan法（8.34±1.59）IU/gHb(37℃)NBT定量法（13.1~30.0）NBT单位Chapman和Dern法（2.8~7.31）IU/gHb(25℃)结果分析红细

8、胞G6PD活性测定从生化代谢解释患儿的临床表现和实验室检查结果GSH的主要作用：①保护红细胞内的含硫氢基（-SH）血红蛋白、酶蛋白和膜蛋白的完整性，免